| 人肽抗生素hPAB-β重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达 |
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| 作者姓名： | 胡金川 饶贤才 黎庶 金晓琳 汪正清 胡福泉 |
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| 作者单位： | 400038,重庆,第三军医大学微生物学教研室;400038,重庆,第三军医大学微生物学教研室;400038,重庆,第三军医大学微生物学教研室;400038,重庆,第三军医大学微生物学教研室;400038,重庆,第三军医大学微生物学教研室;400038,重庆,第三军医大学微生物学教研室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(编号 30171119)、全军医学科研"十五"计划重大项目(编号 01Z070)和国家"863"计划(编号 2002A214211)资助课题 |
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| 摘 要： | ![]()
目的构建人肽抗生素hPAB-β重组质粒,并在大肠杆菌中进行表达,为大量制备hPAB-β奠定基础.方法通过PCR将hPAB-β融合蛋白的CNBr裂解位点改为羟胺裂解,将修改的目标片段克隆到pFAST-HTa质粒中,挑取阳性重组子,酶切出目标片段再亚克隆到pQE32-CP中,含阳性重组子的工程菌用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,进一步以亲和层析纯化融合蛋白,用羟胺裂解分析.结果构建的pFAST-hPAB-β重组质粒经酶切可得到约230bp的片段,与预期大小相符,测序结果表明其序列正确;构建的pQE32-CP-hPAB-β重组表达质粒酶切亦可切出230bp的片段,测序结果表明序列和阅读框均正确;重组表达质粒在大肠杆菌中能表达出Mr约27×103大小的蛋白,表达量约占细菌总蛋白的43%,该融合蛋白以包涵体形式存在,通过亲和层析可获得该蛋白,纯度为80.4%,该融合蛋白经羟胺裂解1h即可得到与合成肽大小相符的小肽.结论本研究成功构建了含hPAB-β重组质粒的工程菌,为进一步研究和大量制备hPAB-β创造了前提.
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| 关 键 词： | 抗生素类 肽 hPAB-β 融合表达 大肠杆菌 质粒 裂解位点 |
| 修稿时间： | 2003-07-10 |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
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