| 猿肾病毒40大T抗原基因永生化大鼠神经前体细胞株的构建 |
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| 引用本文： | 高峰,田玉科,杨辉,安珂,张传汉.猿肾病毒40大T抗原基因永生化大鼠神经前体细胞株的构建[J].中华麻醉学杂志,2005,25(8):597-600. |
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| 作者姓名： | 高峰 田玉科 杨辉 安珂 张传汉 |
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| 作者单位： | 430030,武汉市,华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30170905) |
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| 摘 要： | 目的建立猿肾病毒40大T抗原基因(SV40Tag)永生化大鼠神经前体细胞株,为细胞移植治疗和转基因治疗提供稳定的细胞来源。方法利用脂质体介导的基因转染技术将含有SV40Tag的质粒pCMVSV40T/PUR转染原代培养的新生大鼠神经前体细胞,经嘌呤霉素筛选,阳性克隆扩大培养并连续传代。应用巢蛋白抗体进行细胞鉴定,5%胎牛血清诱导细胞分化后,应用免疫细胞化学法检测其分化能力,观察细胞的形态及其生长状况,绘制细胞生长曲线。用RT-PCR、Southern印迹杂交和免疫细胞化学法检测SV40Tag在转染细胞中的表达。结果转染细胞经筛选培养后获得1 个阳性细胞克隆,免疫细胞化学结果显示细胞的巢蛋白和微管相关蛋白2染色为阳性,增殖能力较强。5%胎牛血清可诱导转染细胞分化为微管相关蛋白2阳性和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞。Southern印迹杂交结果显示转染细胞基因组中存在SV40Tag cDNA,并可检测到SV40Tag mRNA及其蛋白的表达。转染细胞经扩大培养,命名为永生化神经前体细胞。贴壁培养的神经前体细胞,群体倍增时间为(22.9±2.7)h,传代、冻存和复苏对细胞形态及生长无明显影响。结论成功地构建了SV40Tag永生化的大鼠神经前体细胞株。
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| 关 键 词： | 猴病毒40 抗原 多瘤病毒转化 干细胞 |
| 收稿时间： | 12 20 2004 12:00AM |
| 修稿时间： | 2004-12-20 |
Construction of immortalized rat neural progenitor cell strain by transfection with simian virus 40 large T antigene gene |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Simian virus 40 Antigen polyomavirus transforming Stem cells |
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