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| 小鼠组氨酰tRNA合成酶与麦芽糖结合蛋白融合基因在大肠杆菌中的表达与鉴定 | |
| 引用本文： | 张寅丽,舒晓明,卢昕,邵长军,顾明亮,王国春. 小鼠组氨酰tRNA合成酶与麦芽糖结合蛋白融合基因在大肠杆菌中的表达与鉴定[J]. 中华风湿病学杂志, 2013, 17(3) |
| 作者姓名： | 张寅丽 舒晓明 卢昕 邵长军 顾明亮 王国春 |
| 作者单位： | 1. 100730,北京协和医学院研究生院 2. 卫生部中日友好医院风湿免疫科 3. 中国科学院北京基因研究所 |
| 摘 要： | 目的 在大肠杆菌中表达小鼠组氨酰tRNA合成酶(HARS)与麦芽糖结合蛋白(MBP)融合基因,通过亲和层析纯化以获得具有抗原特异性的重组蛋白.方法 提取C57BL/6小鼠肌肉组织总RNA,反转录为cDNA,利用软件设计一对特异性引物,扩增HARS基因上游591对碱基序列.对扩增产物和载体质粒pMALc-5e分别进行双酶切,再用T4连接酶连接得到重组质粒.将其转化大肠杆菌感受态细胞,挑取单克隆培养并鉴定质粒序列.异丙基-β-D硫化吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达后亲和层析纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳对融合蛋白进行相对分子质量粗鉴定,蛋白印迹法鉴定抗原特异性.结果 重组HARS-MBP融合蛋白基因在大肠杆菌胞质中高效表达,亲和层析纯化后的融合蛋白与预测相对分子质量66 000相符,与抗体具有良好的特异结合能力.结论 小鼠HARS-MBP融合基因能够在大肠杆菌中稳定高效地表达,表达的蛋白具有良好的抗原特异性,为后续炎性肌病的研究提供了基础. |
| 关 键 词： | 组氨酸tRNA连接酶 重组融合蛋白质类 HARS-MBP融合蛋白 原核表达 |
Prokaryotic expression of recombinant mouse histidyl-tRNA synthetase-maltose binding protein fusion gene and identification of its antigen specificity |
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| ZHANG Yin-li , SHU Xiao-ming , LU Xin , SHAO Chang-jun , GU Ming-ling , WANG Guo-chun. Prokaryotic expression of recombinant mouse histidyl-tRNA synthetase-maltose binding protein fusion gene and identification of its antigen specificity[J]. Chinese Journal of Rheumatology, 2013, 17(3) | |
| Authors: | ZHANG Yin-li SHU Xiao-ming LU Xin SHAO Chang-jun GU Ming-ling WANG Guo-chun |
| Abstract: | |
| Keywords: | Histidine-tRNA ligase Recombinant fusion proteins HARS-MBP fusion protein Prokaryotic expression |
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