重组人胱抑素C的原核表达及鉴定

目的 构建重组人胱抑素C(cystatin C,Cys C)的原核高效表达质粒,诱导表达并纯化获得Cys C重组蛋白.方法 根据大肠埃希菌编码蛋白的特性设计Cys C编码基因序列,人工合成目的 基因克隆至pET-22b(+)表达载体中,测序及酶切鉴定正确后诱导其在大肠埃希菌BL21中表达,所获得的包涵体蛋白经亲和层析纯化后采用SDS-PAGE及Western印迹鉴定.结果 酶切结果证实构建的表达质粒结构正确;测序结果显示克隆的基因序列所编码的蛋白与GenBank中的CysC氨基酸序列相符;SDS-PAGE及Western印迹结果证实获得的重组CysC融合蛋白分子量约为16 kD,经Ni2+亲和层析纯化获得纯度大于90 %的目的 蛋白.结论 建立了重组人Cys C的原核高效表达系统并获得了Cys C重组蛋白.