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基于JNK通路探讨调更汤对GT1-7下丘脑神经元细胞凋亡的保护作用
引用本文:李盛楠,刘洋,刘小菲,丛超,刘慧聪,归雯佳,王月娇,肖珊,单鑫,徐莲薇.基于JNK通路探讨调更汤对GT1-7下丘脑神经元细胞凋亡的保护作用[J].中国实验方剂学杂志,2019,25(20):49-55.
作者姓名:李盛楠  刘洋  刘小菲  丛超  刘慧聪  归雯佳  王月娇  肖珊  单鑫  徐莲薇
作者单位:上海中医药大学 附属龙华医院, 上海 200032,上海中医药大学 附属龙华医院, 上海 200032,上海中医药大学 附属龙华医院, 上海 200032,上海中医药大学 附属龙华医院, 上海 200032,上海中医药大学 附属龙华医院, 上海 200032,上海中医药大学 附属龙华医院, 上海 200032,上海中医药大学 附属龙华医院, 上海 200032,上海中医药大学 附属龙华医院, 上海 200032,上海中医药大学 附属龙华医院, 上海 200032,上海中医药大学 附属龙华医院, 上海 200032
基金项目:国家自然科学基金面上项目(81574010)
摘    要:目的:研究调更汤通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路改善下丘脑神经元细胞凋亡的作用机制。方法:采用下丘脑神经元细胞GT1-7细胞株,以三丁基氯化锡(TBTC)诱导模拟神经元细胞凋亡模型作为模型组(1 mg·L~(-1)),以17β-雌二醇(17β-E_2)为阳性药物作为17β-E2组(100 nmol·L~(-1)),调更汤低、中、高剂量组(31. 25,62. 5,125 mg·L~(-1))进行干预。以倒置荧光显微镜观察细胞形态学变化;细胞增殖毒性(CCK-8)法检测细胞活力; Hoechst 33258染色观察凋亡细胞核的形态改变;Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染色法检测下丘脑神经元细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JNK通路凋亡相关蛋白凋亡信号调节激酶1(ASK1),JNK,p53,活化半胱氨酸蛋白酶(cleaved Caspase-3)表达水平及JNK抑制剂SP600125干预后磷酸化JNK(p-JNK),cleaved Caspase-3的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组细胞活力显著降低(P 0. 01),细胞凋亡率显著升高(P 0. 01),JNK通路相关蛋白磷酸化ASK1(p-ASK1),p-JNK,磷酸化p53(p-p53),cleaved Caspase-3的表达显著增加(P 0. 01)。与模型组比较,调更汤显著改善GT1-7细胞活力(P 0. 01),降低细胞凋亡率(P 0. 01),调节p-ASK1,p-JNK,p-p53,cleaved Caspase-3蛋白的表达;高剂量调更汤联合应用SP600125(10μmol·L-1)处理后,更显著的抑制GT1-7细胞p-JNK,cleaved Caspase-3的蛋白表达(P 0. 01)。结论:调更汤通过JNK通路改善下丘脑神经元细胞凋亡,为调更汤治疗绝经综合征和中枢神经保护作用提供理论依据。

关 键 词:绝经综合征  下丘脑神经元细胞凋亡  调更汤  c-Jun氨基末端激酶通路
收稿时间:2019/3/2 0:00:00

Protective Effect of Tiaogeng Decoction in Improving Apoptosis of Hypothalamic Neurons Based on JNK Pathway
LI Sheng-nan,LIU Yang,LIU Xiao-fei,CONG Chao,LIU Hui-cong,GUI Wen-ji,WANG Yue-jiao,XIAO Shan,SHAN Xin and XU Lian-wei.Protective Effect of Tiaogeng Decoction in Improving Apoptosis of Hypothalamic Neurons Based on JNK Pathway[J].China Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2019,25(20):49-55.
Authors:LI Sheng-nan  LIU Yang  LIU Xiao-fei  CONG Chao  LIU Hui-cong  GUI Wen-ji  WANG Yue-jiao  XIAO Shan  SHAN Xin and XU Lian-wei
Institution:Longhua Hospital of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200032, China,Longhua Hospital of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200032, China,Longhua Hospital of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200032, China,Longhua Hospital of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200032, China,Longhua Hospital of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200032, China,Longhua Hospital of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200032, China,Longhua Hospital of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200032, China,Longhua Hospital of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200032, China,Longhua Hospital of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200032, China and Longhua Hospital of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200032, China
Abstract:
Keywords:menopause syndrome  hypothalamic neuronal apoptosis  Tiaogeng decoction  c-Jun N-terminal kinase pathway
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