胡黄连苦苷Ⅱ通过下调microRNA-1表达抑制H2O2诱导的心肌细胞凋亡

目的:研究胡黄连苦苷Ⅱ(picrosideⅡ)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡中微小RNA-1(microRNA-1,miR-1)及下游靶基因抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达的影响,探讨胡黄连苦苷Ⅱ的心肌保护作用及其机制。方法:将H9c2心肌细胞随机分为正常组,模型组(H_2O_2,200μmol·L~(-1)),胡黄连苦苷Ⅱ(50,100,200μmol·L~(-1))+H_2O_2(200μmol·L~(-1))组,胡黄连苦苷Ⅱ200μmol·L~(-1)组。胡黄连苦苷Ⅱ与心肌细胞孵育6 h后,加入H_2O_2继续培养2 h。药物处理结束后,噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测细胞存活率,比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(destination access point identifier,DAPI)染色和细胞凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 (cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)检测评估细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中Caspase-3,Bcl-2,miR-1 mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达。结果:与正常组相比,H_2O_2能显著降低细胞生存率,增加细胞凋亡率,且Caspase-3活性和mRNA表达均增加(P 0. 01),同时伴有miR-1 mRNA表达水平的上调及其下游靶基因抗凋亡因子Bcl-2 mRNA表达的下调(P 0. 01)。与模型组比较,胡黄连苦苷Ⅱ预处理可明显升高细胞存活率,明显降低LDH活性,降低细胞凋亡率,明显降低Caspase-3活性和mRNA表达(P 0. 05,P 0. 01),并使Bcl-2 mRNA表达升高(P 0. 05,P 0. 01),Western blot结果表明,胡黄连苦苷Ⅱ能明显下调其下游靶基因抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达(P 0. 05,P 0. 01)。结论:胡黄连苦苷Ⅱ对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞凋亡具有保护作用,其机制与下调miR-1的表达进而上调其靶基因Bcl-2的表达有关。