靶向活化T细胞核因子1基因的shRNA质粒表达载体的构建

 目的　利用pRNAT-U6.1／Neo质粒构建靶向NFAT1基因的3个shRNA,为下一步探索肺癌基因治疗的RNA干扰途径奠定基础。方法　设计3对shRNA（NFAT1-sh-1、NFAT1-sh-2、NFAT1-sh-3）,以人类基因同源性差的无关序列（NFAT1-sh-NC）作为阴性对照。筛选与人类其他基因同源性小、特异性针对目的基因的siRNA。合成并克隆至带有U6启动子的pRNAT -U6.1／Neo质粒中,构建质粒表达载体,通过凝胶电泳鉴定后转化至大肠杆菌中进行培养,并提取质粒进行DNA测序鉴定。结果　成功构建和筛选出靶向NFAT1基因的3对shRNA质粒表达载体,GC比例为40 ％～55 ％。结论　构建的3个靶向NFAT1基因shRNA质粒表达载体有助于肺癌靶向基因治疗RNA干扰的研究。为筛选有效的基因干扰载体,以及对荷瘤肺癌裸鼠靶向RNAi抗肿瘤细胞生长的研究鉴定了基础。