血管内皮生长因子体外诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经元样细胞

目的：本实验探讨血管内皮生长因子对骨髓基质细胞在体外向神经细胞分化的作用。旨在为临床使用BMSCs移植和神经保护剂治疗脑损伤提供实验基础。方法: 采用青年SD大鼠的全骨髓细胞进行培养。传至第3代时，流式细胞分析鉴定骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）表面标志物CD90和CD45。经10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，b-FGF）预诱导24h后，用含不同浓度血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor ，VEGF）的诱导液进行诱导。细胞分为4组：A～C组分别加入浓度为5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml VEGF的诱导液；D组作为对照组，不加VEGF。倒置相差显微镜（×200）下逐日观察细胞形态变化，诱导后的第3天和第10天分别计数每20个随机视野下神经细胞样形态的细胞总数。采用免疫组织化学方法鉴定神经细胞标志蛋白神经烯醇化酶（neuron specific enolase，NSE）。结果: 流式细胞分析结果示P3代BMSCs细胞表面CD90(＋)CD45(－)。诱导第3天A~C组均有细胞出现胞体回缩，呈锥形或圆形，胞体折光性增强，伸出较细长单级或多极突起，并分出次级突起，诱导第10天，A~C组发生以上形态改变的细胞数目较前增多，D组中也有个别细胞出现以上形态改变。B组中的神经元样细胞数目最多，与A组、C组及D组比较，差异有统计学意义（P<0.05）；D组中神经元样细胞数目最少，与A组、B组及C组比较差异有统计学意义（P<0.05）。第10天各组神经元样细胞数目均较第3天增多，各组第3天和第10天神经元样细胞数目相比较差异有统计学意义（P<0.05）。免疫组织化学证实具有神经元样形态的细胞表达NSE。结论:在本实验条件下，VEGF能促进骨髓基质细胞体外向神经元样细胞分化，本实验预设的VEGF的3个浓度中，10ng/ml为最合适的浓度。

Into Neuron-Like Cells By Vascular Endothelial Growth Factor