正交试验设计优化谷胱甘肽硫转移酶A1基因多态性PCR扩增体系

目的筛选谷胱甘肽硫转移酶A1基因PCR体系主要影响因素的最佳水平和最适退火温度,建立简便可行、稳定可靠的人谷胱甘肽硫转移酶A1基因多态性检测方法,为后续相关研究奠定基础。方法通过正交试验设计谷胱甘肽硫转移酶A1基因PCR体系的主要因素、水平组合,筛选各因素最佳水平,通过温度梯度试验快速确立最佳退火温度并验证稳定性,采用限制性片段长度多态性检测(RFLP)方法验证方法准确性。结果20μL GSTA1 PCR反应的最佳条件为9ng模板DNA、4UTaq酶、2.5mM·L^-1 Mg^2+离子浓度、0.1mM·μL^-1 dNTPs、0.4μM·μL^-1引物,最适退火温度为58℃。结论该最优PCR体系简便、稳定、可靠,可应用谷胱甘肽硫转移酶A1基因多态性检测,具有一定推广空间。