| 人抗地高辛单链抗体在大肠杆菌的表达 |
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| 引用本文： | 刘德新,李小鹰,陈瑞晗,郝好杰,王琰. 人抗地高辛单链抗体在大肠杆菌的表达[J]. 中国分子心脏病学杂志, 2002, 2(2): 72-74 |
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| 作者姓名： | 刘德新 李小鹰 陈瑞晗 郝好杰 王琰 |
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| 作者单位： | 1. 解放军总医院
2. 海军总医院 |
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| 基金项目： | 全军“九五”医药卫生科研基金项目（98M145） |
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| 摘 要： | 目的：研究人抗地高辛（Dig）单链抗体（ADAscFv）在大肠杆菌（E．coli）的表达及包涵体变性和复性条件。方法：（1）用PCR扩增人ADAscFv基因，重组于克隆载体pGEM—T，NdeI＋Sail消化回收目的基因，插入pT7．7载体构建表达载体pT—ADAscFv，转化E．coliBL21（DE3），IPTG诱导表达，SDSPAGE分析目的蛋白的表达情况，筛选高表达克隆；（2）提取纯化包涵体，SDS-PAGE分析其纯度，采用不同的方法及条件进行变性及复性，ELISA检测活性。结果：（1）SDS＋PAGE显示，含有重组质粒pT-ADAscFv的E．coli菌株BL21（DE3）的表达产物中有一条约30kD的条带，其分子量与预期值相符，提取纯化的包涵体的纯度较高；（2）ELISA显示，透析复性法和稀释复性法均可使其复性。结论成功地构建了人ADAscFv表达载体，实现了其在E．coli的表达并对其包涵体变性、复性条件进行了研究，为制备适于临床上诊断及治疗Dig中毒的人源性单抗奠定了基础。
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| 关 键 词： | 单链抗体 地高辛 中毒 |
Studies on incolusion body expression of human scFv against digoxin in escherichia coli |
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| Liu Dexin , Li Xiaoying , Chen Rehan , Hao Haojie , Wang Yan. Studies on incolusion body expression of human scFv against digoxin in escherichia coli[J]. Molecular Cardiology of China, 2002, 2(2): 72-74 |
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| Authors: | Liu Dexin Li Xiaoying Chen Rehan Hao Haojie Wang Yan |
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| Affiliation: | Department of Geriatric Cardiology, PLA General Hospital, Beijing(100853 |
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