弓形虫表面抗原SAG2的DNA疫苗载体构建及在Vero细胞中的表达 |
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引用本文: | 龙彩虹,吴少庭,翁亚彪,高世同,张仁利,林绮萍,谢德华,卜春玲,雷明军,黄达娜.弓形虫表面抗原SAG2的DNA疫苗载体构建及在Vero细胞中的表达[J].中国寄生虫病防治杂志,2004,17(6):331-334. |
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作者姓名: | 龙彩虹 吴少庭 翁亚彪 高世同 张仁利 林绮萍 谢德华 卜春玲 雷明军 黄达娜 |
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作者单位: | [1]华南农业大学兽医学院 [2]深圳市卫生防疫站分子生物室,广东深圳518020 [3]华中科技大学同济医学院 |
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摘 要: | 目的构建弓形虫表面抗原SAG2的DNA疫苗载体,并在Vero细胞中表达。方法设计1对引物,从弓形虫RH株速殖子基因组DNA中扩增SAG2全长编码基因,构建pVAXl—SAG2真核表达重组质粒。以限制性内切酶Kpn Ⅰ和EcoR Ⅰ进行双酶切、PCR鉴定,纯化后进行测序鉴定。脂质体介导法瞬时转染Vero细胞,同时以pVAX1为对照,48h后收集细胞,Western—blot鉴定。结果从弓形虫RH株DNA中扩增出了577bp的SAG2基因,构建了真核表达载体pVAX1—SAG2,在质脂体介导下转染Vero细胞,质粒DNA成功的转染到细胞中。通过Westen-blot分析,细胞裂解液样品有1条可被弓形虫免疫血清所识别的约17ku大小的条带,与预计大小一致。结论真核表达载体pVAX1—SAG2在Vero细胞中有一定表达,且有一定的活性。
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关 键 词: | 弓形虫 SAG21基因克隆 表达 |
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