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| 捕获噬菌体酶联免疫吸附法筛选抗去唾液酸糖蛋白受体单链抗体的价值 | |
| 引用本文： | 王炜煜,易继林,邓云华,曹利民.捕获噬菌体酶联免疫吸附法筛选抗去唾液酸糖蛋白受体单链抗体的价值[J].中华检验医学杂志,2006,29(4):335-338. |
| 作者姓名： | 王炜煜 易继林 邓云华 曹利民 |
| 作者单位： | 1. 430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科 2. 430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院皮肤科 3. 华中科技大学同济医学院免疫学系 |
| 摘 要： | 目的评价捕获噬菌体酶免疫吸附试验法(ELISA)在筛选抗去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)单链抗体(scFv)中的价值。方法以含ASGPR基因的质粒(CRDH1/pET3b)为模板,通过聚合酶链反应扩增获得ASGPRH1亚单位糖识别区基因(CRDH1),定向克隆至原核表达载体pET-32c,并经IPTG诱导表达,其表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化;然后,采用捕获噬菌体ELISA对人源噬菌体抗体库进行筛选和鉴定,同时对筛选的抗CRDH1单链抗体进行DNA测序、表达、纯化和免疫印记鉴定。然后,与间接噬菌体ELISA比较。结果CRDH1/pET-32c在原核系统中经诱导表达出分子量约35000的融合蛋白,且以包涵体形式存在;通过Ni2+亲和柱纯化获得CRDH1融合蛋白后,采用捕获噬菌体ELISA进行四轮筛选,在60个噬菌体克隆中有45株与CRDH1特异性结合,其中仅1株与重组蛋白标签有交叉结合反应。DNA序列分析表明,有9株DNA序列各异,9株可分泌性表达与CRDH1特异性结合的scFv,纯化的scFv也可特异性识别rCRDH1。计算该筛选方法的假阳性率为2%,低于间接噬菌体ELISA筛选的假阳性率(58%)。结论捕获噬菌体ELISA筛选CRDH1特异性scFv可有效降低硫氧还蛋白标签(Trx·Tag)引起的假阳性,提高筛选阳性率,并成功筛选出9株具有rCRDH1特异性的scFv。 |
| 关 键 词： | 单链抗体 酶联免疫吸附测定 去唾液酸糖蛋白受体 融合蛋白 |
| 收稿时间： | 2005-09-26 |
| 修稿时间： | 2005年9月26日 |
Generating the human asialoglycoprotein receptor specific scFv by capture phage ELISA |
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| WANG Wei-yu,YI Ji-lin,DENG Yun-hua,CAO Li-min.Generating the human asialoglycoprotein receptor specific scFv by capture phage ELISA[J].Chinese Journal of Laboratory Medicine,2006,29(4):335-338. | |
| Authors: | WANG Wei-yu YI Ji-lin DENG Yun-hua CAO Li-min |
| Abstract: | |
| Keywords: | Single-chain Fv antibody Enzyme linked immunosorbent assay Asialoglycoprotein receptor Fusion protein |
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