黄芪甲苷配伍三七总皂苷对脑缺血大鼠BMSCs移植后神经修复的影响

目的 探讨黄芪甲苷IV（astragaloside IV，AST IV）与三七总皂苷（Panax notoginseng saponins，PNS）配伍联合骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）移植对脑缺血大鼠神经功能修复的影响。方法 大鼠随机分为对照组、模型组、AST IV（10 mg/kg）与PNS（25 mg/kg）低剂量组、AST IV（20 mg/kg）与PNS（50 mg/kg）高剂量组、BMSCs输注组、BMSCs输注联合AST IV（10 mg/kg）与PNS（25 mg/kg）低剂量组、BMSCs输注联合AST IV（20 mg/kg）与PNS（50 mg/kg）高剂量组。全骨髓贴壁法分离、纯化BMSCs，流式细胞术检测BMSCs表面标志物CD29、CD90、CD34、CD45阳性表达率。各给药组给予药物进行干预，采用大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）建立局灶性脑缺血模型，采用Longa法测定各组大鼠神经功能缺损症状；采用苏木素-伊红（HE）染色与尼氏染色测定各组大鼠脑组织病理变化；采用免疫荧光法检测各组大鼠海马区BMSCs和神经元特异性烯醇化酶（neuron specific enolase，NSE）阳性表达；采用Western blotting法测定各组大鼠脑组织脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）和胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line derived neurotrophic factor，GDNF）蛋白表达。结果 成功分离培养BMSCs，表面标志物CD29、CD90、CD34、CD45鉴定符合BMSCs特征。大鼠脑缺血后出现神经功能缺损症状及脑组织病理损伤，模型组大鼠神经功能缺损评分和脑组织细胞损伤率显著升高（P<0.01），尼氏体数量显著减少（P<0.01）；各给药组均能够不同程度减轻上述病理改变，其中效应最强为BMSCs输注联合AST Ⅳ＋PNS高剂量组（P<0.01），优于单用药物和单用BMSCs输注。大鼠脑缺血后神经元损伤，输注BMSCs后，细胞可在缺血侧脑组织增殖并分化为神经元，药物联合BMSCs输注能够增强BMSCs在大鼠脑内的增殖和分化。大鼠脑缺血后，BDNF和GDNF蛋白表达增加，各药物组均能够不同程度上调其表达，其中效应最强为BMSCs输注联合ASTⅣ＋PNS组（P<0.01），优于单用药物和单用BMSCs输注。结论 AST Ⅳ配伍PNS能够促进BMSCs移植的存活，靶向修复脑缺血后受损神经元，其机制可能与改善脑缺血后脑内局部微环境，促进移植干细胞的存活、增殖和分化有关。

Effect of astragaloside IV combined with Panax notoginseng saponins on nerve repair after BMSCs transplantation in rats with cerebral ischemia