真核荧光蛋白表达载体pEGVP-C3-B7．2-MAGE-1的构建与表达

目的：构建表达B7．2和MAGE-1的绿色荧光共表达载体pEGFP-C3-B7．2-MAGE-1，并在真核细胞中表达。方法：根据GenBank中的序列，对B7．2、MAGE-1各设计一对两端带有特定限制性酶切位点的引物，分别从乳腺组织、乳癌组织提取总RNA，进行RT-PCR后，将两扩增产物分别克隆在pGEM-T载体，经测序证实碱基序列无误后，双酶切pGEM-T载体，回收目的片段，将两目的片段亚克隆至真核绿色荧光蛋白共表达载体（pEGFP-C3）上，并转染真核细胞，观察其在真核细胞中表达。结果及结论：pEGFP-C3-B7．2-MAGE-1真核表达载体经酶切及基因序列分析验证，PCR扩增片段与选择的目的片段序列相符，pEGFP-C3-B7．2-MAGE-1真核表达载体构建成功。该表达载体转染EC9706细胞后，用免疫荧光显微镜观察和RT-PCR分析，该重组载体能够在真核细胞中广泛表达。