| Wilson病基因突变体的体外构建及表达研究 |
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| 引用本文： | 吴志英,王柠,慕容慎行. Wilson病基因突变体的体外构建及表达研究[J]. 中华神经科杂志, 2003, 36(5): 339-342 |
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| 作者姓名： | 吴志英 王柠 慕容慎行 |
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| 作者单位： | 350005,福州,福建医科大学附属第一医院神经内科 |
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| 基金项目： | 国家自然基金资助项目 ( 3 0 0 0 0 182 )，福建省重大科技项目 (2002Y001及200 0Z142) |
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| 摘 要： | ![]()
目的 研究并比较正常ATP7B蛋白及其突变体蛋白的表达水平，为进一步探寻ATP7B蛋白参与铜转运的机制奠定基础。方法 构建含健康人全长Wilson病(WD)cDNA片段的真核细胞表达质粒ATP7BcDNA／pcDNA3，定点诱变三种具有代表意义的突变体表达质粒Arg778Leu／pcDNA3、Gln914Ter／pcDNA3和Thr935Met／pcDNA3；同时设计并制备包含ATP7B蛋白N端主要功能区的具有高度特异性和敏感性的ATP7Bn33-629抗体；分别以上述质粒瞬时转染中国仓鼠卵细胞(Chinese hamster ovary，CHO)，收集细胞提取蛋白，以ATP7Bn33—629抗体为一抗，免疫印迹分析并比较正常和突变体ATP7B蛋白的表达程度。结果 ATP7B蛋白在正常ATP7BcDNA／pcDNA3表达质粒和Arg778Leu／pcDNA3、Thr935Met/pcDNA3错义突变体表达质粒转染的CHO细胞中表达量一致，而在Gln914Ter／pcDNA3截短突变体表达质粒转染的CHO细胞中表达量明显增加。结论 成功构建了WD突变体表达质粒并在转染细胞中表达，为进一步的功能研究打下基础。错义突变未改变ATP7B蛋白表达量，提示错义突变引起铜代谢障碍的机制与蛋白表达量无关。截短突变产生的ATP7B蛋白产物表达量增加可能与其所需的翻译时间相对较短有关。
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| 关 键 词： | Wilson病 基因突变 ATP7B蛋白 铜代谢障碍 发病机制 真核细胞表达质粒 |
| 修稿时间： | 2003-07-08 |
Construction of site-directed mutant variants of ATP7B in vitro and their expression |
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| WU Zhi-ying,WANG Ning,MURONG Shen-xing. Construction of site-directed mutant variants of ATP7B in vitro and their expression[J]. Chinese Journal of Neurology, 2003, 36(5): 339-342 |
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| Authors: | WU Zhi-ying WANG Ning MURONG Shen-xing |
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| Affiliation: | WU Zhi-ying,WANG Ning,MURONG Shen-xing. Department of Neurology,First Affiliated Hospital of Fujian Medical University,Fuzhou 350005,China |
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| Abstract: | ![]()
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| Keywords: | Hepatolenticular degeneration Adenosinetriphosphatase Cation transport proteins Mutation missense Transfection |
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