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尿激酶型纤溶酶原激活因子cDNA的克隆与原核表达
引用本文:邱峰,刘振杰,陈富. 尿激酶型纤溶酶原激活因子cDNA的克隆与原核表达[J]. 热带医学杂志, 2009, 9(4): 389-391
作者姓名:邱峰  刘振杰  陈富
作者单位:广东省中医院检验科,广州,510105;广东省中医院检验科,广州,510105;广东省中医院检验科,广州,510105
摘    要:目的构建尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21中表达,为进一步研究uPA奠定基础。方法应用逆转录RT-PCR,从人肝细胞cDNA中扩增人尿激酶型纤溶酶原激活因子基因序列,与原核表达质粒pET32a重组,获得表达质粒uPA-pET32a。用氨苄青霉素平板筛选转化子,双酶切与DNA测序进行鉴定,用IPTG诱导表达,并用Western blotting进行鉴定。结果从肝细胞cDNA中扩增的uPA基因片段长1296bp,酶切及DNA测序证实uPA-pET32a重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为68900Mr,经Western blotting证实为目的蛋白。结论成功构建了重组原核表达质粒uPA-pET32a,并能在大肠埃希菌内表达,所表达的融合蛋白分子量大小与预期的相一致,为进一步的研究奠定了基础。

关 键 词:尿激酶型纤溶酶原激活因子  克隆  原核表达

Cloning and Expression of Urokinase Type Plasminogen Activator cDNA
QIU Feng,LIU Zhen-jie,CHEN Fu. Cloning and Expression of Urokinase Type Plasminogen Activator cDNA[J]. Journal Of Tropical Medicine, 2009, 9(4): 389-391
Authors:QIU Feng  LIU Zhen-jie  CHEN Fu
Affiliation:Clinical Laboratory of Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine;Guangzhou 510105;China
Abstract:
Keywords:urokinase type plasminogen activator  cloning  expression  
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