| PRAK不同突变体的构建、表达及细胞内定位的研究 |
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| 引用本文： | 龚小卫,彭毅,唐靖,魏洁,邓鹏,姜勇. PRAK不同突变体的构建、表达及细胞内定位的研究[J]. 贵阳医学院学报, 2007, 32(4): 341-344 |
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| 作者姓名： | 龚小卫 彭毅 唐靖 魏洁 邓鹏 姜勇 |
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| 作者单位： | 南方医科大学,病理生理学教研室,广东省蛋白质组学重点实验室,广东,广州,510515 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 , 广东省科技计划 , 广东省医学科学技术研究基金 |
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| 摘 要： | ![]()
目的:构建p38调节/激活蛋白激酶(PRAK)不同突变体的绿色荧光蛋白融合表达载体,并在真核细胞中表达后,观察这些突变体在细胞内的定位情况.方法:将克隆在绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上的野生型PRAK通过定点突变技术构建其无活性突变体PRAK(T182A)、活性突变体PRAK(T182D)、无激酶活性突变体PRAK(KM)、核定位信号缺失突变体PRAK(NLSm)及核输出信号缺失突变体PRAK(NESm),随后转染NIH3T3细胞,并在荧光显微镜下观察其表达和细胞内定位情况.结果:经测序鉴定各种PRAK不同突变体正确无误后,在NIH3T3细胞中得到高量表达;融合蛋白发出的绿色荧光表明,在静息状态下,野生型PRAK(WT)、PRAK(182A)、PRAK(182D)、PRAK(KM)和PRAK(NESm)主要分布于细胞核内,而PRAK(NLSm)在细胞中均匀分布;在受到NaAsO2刺激后,PRAK(WT)和PRAK(KM)移位出核,而PRAK(182A)、PRAK(182D)和PRAK(NESm)失去了移位出核的能力,PRAK(NLSm)则与刺激前无明显差异.结论:成功构建了PRAK不同突变体的绿色荧光蛋白融合表达载体并在真核细胞中进行了表达,且不同的突变体能够影响PRAK的细胞内定位.
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| 关 键 词： | p38调节/激活蛋白激酶 点突变 载体构建 基因表达 细胞内定位 |
| 文章编号： | 1000-2707（2007）04-0341-04 |
| 修稿时间： | 2007-05-21 |
A Study on the Construction, Expression and Intracellular Localization of Different Mutants of p38 Regulated/Activated Protein Kinase (PRAK) |
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| GONG Xiaowei,PENG Yi,TANG Jing,WEI Jie,DENG Peng,JIANG Yong. A Study on the Construction, Expression and Intracellular Localization of Different Mutants of p38 Regulated/Activated Protein Kinase (PRAK)[J]. Journal of Guiyang Medical College, 2007, 32(4): 341-344 |
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| Authors: | GONG Xiaowei PENG Yi TANG Jing WEI Jie DENG Peng JIANG Yong |
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| Affiliation: | Department of Pathophysiology and Key Laboratory for Functional Proteomics of Guangdong Province, Southern Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong, China |
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| Abstract: | ![]()
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| Keywords: | p38 regulated/activated protein kinase point mutation vector construction gene ex-pression intracellular localization |
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