| 金银花nrDNA ITS区聚合酶链反应条件的研究 |
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| 引用本文： | 王冲之,李娟,李萍.金银花nrDNA ITS区聚合酶链反应条件的研究[J].中国药科大学学报,2004,35(4):13-16. |
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| 作者姓名： | 王冲之 李娟 李萍 |
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| 作者单位： | 中国药科大学现代中药重点实验室,南京,210038 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，教育部跨世纪优秀人才培养计划，教育部优秀青年教师资助计划 |
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| 摘 要： | 目的:金银花nrDNA ITS区序列G C含量为68%,用常规的PCR方法扩增效果差.本研究通过改变扩增程序及使用改性剂的方法显著提高了金银花nrDNA ITS区的扩增效率.方法:分别从金银花叶及药材中提取总DNA,通过优化扩增条件,对nrDNA ITS区进行扩增,并比较了两种优化方法的差别及适应性.方法1:提高变性温度至97℃;方法2:添加混合改性剂(DMSO 4%-甘油10%).结果:与方法1相比,方法2可降低变性温度5 ℃,升高退火温度9 ℃,降低镁离子浓度至0.5 mmol/L,降低Taq DNA聚合酶用量至0.1 U(30 μl体系),PCR产物量显著提高,且可消除植物DNA粗提物中杂质的干扰.结论:通过提高退火温度及添加改性剂可克服高G C含量金银花nrDNA ITS区序列扩增的困难,该方法的建立有助于解决植物来源DNA模板的PCR扩增问题.
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| 关 键 词： | 金银花 nrDNA ITS区 高G C含量 PCR扩增 反应条件优化 |
| 文章编号： | 1000-5048(2004)04-0303-04 |
| 修稿时间： | 2004年1月10日 |
Studies on Polymerase Chain Reaction Conditions of nrDNA ITS Region of Lonicera japonica Thunb |
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| WANG Chong-Zhi,LI Juan,LI Ping.Studies on Polymerase Chain Reaction Conditions of nrDNA ITS Region of Lonicera japonica Thunb[J].Journal of China Pharmaceutical University,2004,35(4):13-16. |
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| Authors: | WANG Chong-Zhi LI Juan LI Ping |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Lonicera japonica Thunb nrDNA ITS region G C rich PCR amplification Modification of reaction condition |
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