可表达随机12肽库的逆转录病毒初级文库构建方法的建立及其实验参数的优化

目的 建立可表达随机12肽库的逆转录病毒初级文库的构建方法 并优化其实验参数.方法 体外合成可编码随机12肽的DNA片段.将该DNA片段克隆入带有EGFP标记的逆转录病毒载体pQCX-IX-EGFP,连接产物电击转化大肠杆菌,转化所得菌液即为可表达随机12肽库的逆转录病毒初级文库,其间通过大量的实验优化:插入片段与载体的摩尔比、连接反应的条件、连接产物的DNA浓度以及电击转化参数等关键的实验参数.结果 按照本研究所确立的方法 和最佳实验参数构建的可表达随机12肽库的逆转录病毒初级文库的滴度为2.85×105cfu/mL,成功转化子的比例接近100%,编码随机12肽的DNA序列正确率为83%.结论 成功建立了可表达随机12肤库的逆转录病毒初级文库的构建方法 ,并确定了最佳的实验参数,为后续的可表达随机12肽库的逆转录病毒表达系统的建立奠定了良好的基础.

Construction method establishment and experiment parameter optimization of retroviral primary library expressing random 12 peptide

[Objective] To establish construction method of retroviral primary library expressing random 12 peptide and optimize its experiment parameters.[Methods] Double-stranded DNA fragments encoding random 12 peptide were synthesized and cloned into retroviral vector pQCXIX-EGFP, the ligation products were electroporated into E.coli thus the electroporated products composed the retroviral primary library expressing random 12 peptide. Meanwhile experiment parameters including the ratio of DNA fragments to retrovira...