重组志贺毒素的表达及活性的初步测定

目的:表达Stx2a'-LHRH重组毒素,探讨其特异杀伤癌细胞的作用。方法:用PCR技术扩增带有NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点的Stx2a'-LHRHDNA基因,克隆至pET-28a(+)质粒中,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取单菌落培养,提取质粒、酶切,IPTG诱导、表达,光镜下观察Stx2a'-LHRH重组毒素对Hep-2细胞的细胞毒作用。结果:经鉴定、测序,获得重组质粒pET-SL,SDS-PAGE及凝胶薄层扫描分析,在分子量约28?000处有明显的表达带,Stx2a'-LHRH重组毒素对Hep-2细胞有明显杀伤作用。结论:利用分子生物学技术成功构建了带有Stx2a'-LHRH重组毒素基因的质粒,使其表达Stx2a'-LHRH重组毒素,而且对Hep-2细胞有明显细胞毒作用,为进一步研究导向药物奠定了基础。