| 萤光素酶报告基因细胞模型在筛选靶向调控RAC1的大黄酸衍生物中的应用 |
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| 引用本文： | 李钊全,粟正英,梁丹丹,王春苗,蓝富,李俊莹,田炜,黎丹戎,侯华新. 萤光素酶报告基因细胞模型在筛选靶向调控RAC1的大黄酸衍生物中的应用[J]. 中国药理学通报, 2019, 0(7): 1025-1030 |
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| 作者姓名： | 李钊全 粟正英 梁丹丹 王春苗 蓝富 李俊莹 田炜 黎丹戎 侯华新 |
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| 作者单位： | 1.广西医科大学药学院;2.广西国际壮医医院药学部;3.广西医科大学生命科学研究院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(No 81460561) |
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| 摘 要： | 目的 构建含RAC1启动子萤光素酶报告基因CNE1-RAC1-Luc2稳转细胞模型,探讨其在转录水平筛选靶向调控RAC1抗肿瘤活性的大黄酸衍生物中的应用。方法 利用RAC1启动子序列,设计合成萤光素酶报告基因-慢病毒重组载体,感染鼻咽癌CNE1细胞,获得稳定表达萤光素酶的细胞;采用萤光素酶报告基因检测试剂盒,检测RAC1激活剂PMA和抑制剂NSC23766刺激该细胞后的萤光素酶发光值,并观察系列大黄酸衍生物对RAC1启动子萤光素酶活性的影响,Western blot验证细胞RAC1蛋白表达的变化。结果 双酶切实验显示,含RAC1启动子萤光素酶报告基因的慢病毒表达载体构建成功;经嘌呤霉素筛选,获稳定表达萤光素酶的CNE1-RAC1-Luc2细胞,转染效率达90%以上;RAC1萤光素酶报告基因检测系统对RAC1激活剂和抑制剂反应灵敏,萤光素酶活性与Western blot实验中RAC1蛋白表达结果一致;系列大黄酸衍生物对CNE1-RAC1-Luc2细胞萤光素酶活性的调控作用与Western blot结果基本一致。结论 成功构建了含RAC1启动子的萤光素酶报告系统的细胞模型,为高通量进行靶向RAC1药物的筛选提供一个实用的平台。
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| 关 键 词： | RAC1 萤光素酶报告基因 鼻咽癌CNE1细胞 大黄酸衍生物 细胞模型 药物筛选 |
Construction of luciferase reporter gene cell model and its application in screening rhein derivatives targeting RAC1 |
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| LI Zhao-quan,SU Zheng-ying,LIANG Dan-dan,WANG Chun-miao,LANFu,LI Jun-ying,TIAN Wei,LI Dan-rong,HOU Hua-xin. Construction of luciferase reporter gene cell model and its application in screening rhein derivatives targeting RAC1[J]. Chinese Pharmacological Bulletin, 2019, 0(7): 1025-1030 |
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| Authors: | LI Zhao-quan SU Zheng-ying LIANG Dan-dan WANG Chun-miao LANFu LI Jun-ying TIAN Wei LI Dan-rong HOU Hua-xin |
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| Affiliation: | (College of Pharmacy, Guangxi Medical University, Nanning 530021,China;Life Sciences Research Institute, Guangxi Medical University, Nanning 530021,China;Dept of Pharmacy, Guangxi International Zhuang Medicine Hospital,Nanning 530201,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RAC1 luciferase reporter gene nasopharyngeal carcinoma CNE1 cells rhein derivative cell model drug screening |
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