人骨髓来源的多能成体祖细胞分离纯化及体外培养的实验研究

目的：建立体外分选纯化人多能成体祖细胞(muhipotent adult progenitor cills from bone marrow，MAPCs)的方法，用自行配制的细胞培养基对MAPCs进行体外培养，了解其生长、增殖特性。方法：取健康志愿者适量骨髓后采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞，对单个核细胞行贴壁培养后，将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45，Gly-A免疫微磁珠负分选，流式细胞仪鉴定分选后细胞纯度；培养观察细胞生长情况，对传代到不同阶段的细胞进行流式细胞分析，初步了解MAPCs在培养、增殖过程中的免疫学稳定性。结果：①通过免疫磁性分离(magnetic activated cell sorting，MACS)分选，平均每1&;#215;10^9L^-1骨髓贴壁细胞可分选出约(5．1&;#177;2．8)&;#215;10^7L^-1数量级的MAPCs，分选前后细胞活力分别为(96．7&;#177;1.7)％和(96．0&;#177;2．4)％，差异无显著性意义。②用自制的培养基培养分选后的MAPCs，细胞生长良好，最长传代到第16代。③流式细胞仪分析获取的CD45^-，Gly-A^-细胞纯度大于98％；流式细胞仪分析传代第4，8，12代MAPCs，CD45^-，Gly-A^-细胞纯度大于98％。结论：①CD45，Gly-A免疫微磁珠负分选可从骨髓细胞中分选出高纯度的MAPCs。②自行研制的人MAPCs培养基能成功体外培养MAPCs。