腺病毒载体介导的血友病A基因治疗的实验研究

目的构建含人凝血因子Ⅷ基因（hFⅧ）的高效表达重组腺病毒载体。方法将含hFⅧ-cDNA（B肽缺失型）插入质粒pAdCMV－Linkerl多克隆位点，形成含SV40内含子结构的重组质粒pA－dl－hFⅧ。证实目的基因能在COS－7细胞中表达有凝血活性的FⅧ因子后，分别与pBHG10共转染至293包装细胞，经同源重组，形成E1／E3缺失型重组腺病毒AdI－hFⅧ。经鉴定和纯化，用于体内外基因转移和表达的研究。结果该病毒载体能在COS－7、A549等各种离体细胞高效转移，并表达hFⅧ蛋白。经家兔耳缘静脉注射后，hFⅧ因子表达量在l～2周内升至最高，并维持低水平至少4周。结论腺病毒介导的人B肽缺失型凝血因子Ⅷ基因能在体内外有效地转移和表达，该研究也为血友病A基因治疗提供了一条新途径。