| 降落和重叠延伸PCR构建靶向肿瘤干细胞腺病毒载体及感染实验 |
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| 引用本文： | Zhang C,Liu GB,Tian PG,Zhou CP,Li XN. 降落和重叠延伸PCR构建靶向肿瘤干细胞腺病毒载体及感染实验[J]. 南方医科大学学报, 2011, 31(9): 1513-1517 |
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| 作者姓名： | Zhang C Liu GB Tian PG Zhou CP Li XN |
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| 作者单位： | 南方医科大学病理学系/广东省分子肿瘤病理学重点实验室;南方医科大学南方医院妇产科 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30871156);广东省科技计划项目(2007B031001001,2009B030803041);广东省自然科学基金(8151051501000057)~~ |
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| 摘 要： | ![]()
目的应用降落和重叠延伸PCR法构建对肿瘤干细胞有特异靶向性的高效载体-复制缺陷型腺病毒载体,观察其对CD133+人大肠癌细胞株SW480的感染效率。方法利用重叠延伸PCR技术扩增5型腺病毒纤毛球端HI环两端的基因序列,定向插入真核表达质粒pEGFP-N1中,构建重组质粒pEGFP-N1.KNOB△HI,同时在缺失HI环部位引入EcoRV限制性酶切位点。在此基础上,用降落PCR克隆纤毛基因全长编码区序列,构建出腺病毒穿梭质粒pNEB-F5。利用凝胶图像分析和基因测序验证所构建质粒的正确性。再与pAdEasy-1,pShuttle-GFP在E.coli BJ5183中同源重组,得腺病毒载体Ad5FHI-GFP和Ad5-GFP。用Ad5FHI-GFP和Ad5-GFP分别感染CD133+人大肠癌细胞株SW480,通过荧光显微镜观察感染效率。结果降落PCR和重叠延伸PCR都扩增出特异性条带,测序结果与预期相符。与Ad5-GFP相比,Ad5FHI-GFP对CD133+人大肠癌细胞株SW480有显著提高。结论利用降落和重叠延伸PCR成功构建新型靶向肿瘤干细胞的腺病毒载体,利用降落和重叠延伸PCR成功构建新型靶向肿瘤干细胞的腺病毒载体,其对CD133+人大肠癌细胞株SW480实验显示Ad5FHI-GFP组感染效率明显强于Ad5-GFP组。
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| 关 键 词： | 降落PCR 重叠延伸PCR 肿瘤干细胞 复制缺陷型腺病毒 穿梭质粒 |
Touchdown PCR and overlap extension PCR for generating CD133(+) cancer stem cell-selective adenovirus vector |
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| Zhang Chao,Liu Guo-bing,Tian Ping-ge,Zhou Chun-ping,Li Xue-nong. Touchdown PCR and overlap extension PCR for generating CD133(+) cancer stem cell-selective adenovirus vector[J]. Journal of Southern Medical University, 2011, 31(9): 1513-1517 |
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| Authors: | Zhang Chao Liu Guo-bing Tian Ping-ge Zhou Chun-ping Li Xue-nong |
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| Affiliation: | Department of Pathology, Southern Medical University, Guangzhou, China. zhangchao200791@163.com |
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| Abstract: | ![]()
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