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| 血液肿瘤CD44基因检测及4亚型克隆原核表达 | |
| 引用本文： | 蔡壬辛,洪旭灿,张轩,李沫,秦笙,许振杰,曾建明. 血液肿瘤CD44基因检测及4亚型克隆原核表达[J]. 实验与检验医学, 2015, 0(1): 7-10,27 |
| 作者姓名： | 蔡壬辛 洪旭灿 张轩 李沫 秦笙 许振杰 曾建明 |
| 作者单位： | 1. 广东省中医院检验科,广东 广州,510006 2. 佛山市第二人民医院检验科,广州 佛山,528000 |
| 基金项目： | 广东省医学科研基金资助项目 |
| 摘 要： | 目的检测血液肿瘤细胞株K562、HL-60及临床急慢性粒细胞白血病患者外周血细胞CD44分子表达、分型情况,通过基因重组技术原核表达CD44分子。方法根据CD44 m RNA剪切模式设计引物,PCR扩增CD44基因,测序比对分析分子亚型,然后酶切插入原核表达载体p ET32a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后进行Western blot分析。结果9例临床标本均为CD44isoform4型,K562细胞株中未能检测到CD44,HL-60细胞株CD44为isoform4变异型;在37℃1m M的IPTG诱导2h后,CD44基因胞外区片段(h CD44om)的蛋白表达量最大,约占菌体总蛋白的48.6%,Western blot检测显示为特异性的CD44蛋白。结论 AML和CML外周血标本分子为CD44isoform4型,HL-60细胞株为CD44isoform4变异型,可能为m RNA新的剪切体及基因组不稳定突变所致;在大肠埃希菌中成功表达CD44isoform4型蛋白胞外区多肽,为后续单克隆抗体研制奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 白血病干细胞 人CD44基因 原核表达 基因重组技术 |
Detection of the expression of CD44 gene in leukemia and prokaryotic expression of CD44 isoform 4 subtype in |
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| Affiliation: | CAI Renxin;HONG Xucan;ZHANG Xuan;Department of Laboratory Medicine, Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine; |
| Abstract: | |
| Keywords: | Leukemic stem cells (LSCs) Human CD44 gene Prokaryotic expression Gene recombination technique |
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