老年神经变性疾病蛋白基因研究：3种α-突触核蛋白提取纯化方法的比较

目的：用经济、简便、快捷的方法得到大量、高纯度的α-突触核蛋白。方法：将重组的proEXNACP，pGEXNACPH和pTYBNACP质粒分别转入大肠杆菌DH5α，BL21和ER2566细胞进行培养增菌，IFYG诱导产生α-突触核蛋白；超声破碎、离心粗提取得到融合的α-突触核蛋白；分别经Ni-NTAresin，Glutathione Sepharose4B和Chitin Beads纯化，得到α-突触核蛋白。用SDS-PAGE电泳观察纯度、Western杂交检测正确性、用BCA蛋白定量法测定蛋白含量。结果：3种方法均能得到较高纯度的α-突触核蛋白，其中用Ni-NTA resin提取纯化的α-突触核蛋白的纯度最高；蛋白收获量分别是10mg／L，5mg／L和5mg／L；经济耗费和实验的繁简程度没有较大差异。结论：3种方法均可作为α-突触核蛋白的提取方法。