|
|||||
|
|
| 重组人白血病抑制因子在大肠杆菌中的表达及纯化 | |
| 作者单位： | ;1.湖北医药学院基础医学院;2.北京协和医学院基础学院中国医学科学院基础医学研究所生化学系 |
| 摘 要： | 目的:利用大肠杆菌表达并制备重组人源白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF)。方法:构建p ET-30a-rh LIF表达载体并转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)之中,IPTG诱导使无标签的目的蛋白呈可溶性表达,继而利用三步柱层析纯化目的蛋白。最后对所获目的蛋白活性进行测定,并对其N端和C端的完整性分别应用Edman测序法以及质谱法进行鉴定。结果:通过三步柱层析以及中间的内毒素去除步骤可使无标签rh LIF获得纯化,检测结果提示所获目的蛋白内毒素水平<1 EU/μg,其活性同市售商品化LIF产品一致,Edman测序结果提示少部分目的蛋白N端存在甲硫氨酸修饰,质谱检测结果表明所获目的蛋白C端完整性较好。结论:建立了一种新的重组人源白血病抑制因子表达和纯化的方法,本方法不需利用标签蛋白,并可有效降低所获蛋白中内毒素水平,所获rh LIF蛋白可用于干细胞培养以及相关生物学研究。 |
| 关 键 词： | 人白血病抑制因子 表达 纯化 大肠杆菌 |
Expression and Purification of Recombinant Human Leukemia Inhibitory Factor from E.coli |
|
| Abstract: | |
| Keywords: | |