miR⁃296⁃5p在糖尿病肾病db/db小鼠血浆外泌体中的表达及功能

目的：明确miR?296?5p在糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）db/db小鼠血浆外泌体中的表达并初探其在转录因子Snail1介导的上皮?间充质转化（epithelial?mesenchymal transition，EMT）中的作用。方法：先后采集12只12周龄db/db小鼠（模型组）和12只12周龄db/m小鼠（对照组）血浆，提取外泌体RNA进行测序，利用生物信息学软件筛选靶向Snail1的差异miRNA；利用透视电镜、纳米颗粒跟踪分析鉴定外泌体；并通过小鼠肾组织及血浆外泌体验证获得目标miRNA，双荧光素酶实验明确其与Snail1的靶向关系，RT?qPCR和免疫组化检测db/db小鼠和db/m小鼠肾组织中Snail1、钙黏附蛋白（E?cadherin）和α?平滑肌肌动蛋白（α?smooth muscle actin， α?SMA）基因和蛋白的表达。结果：miR?296?5p在db/db小鼠血浆外泌体及肾组织中表达下调（P=0.011，P=0.001）；双荧光素酶实验证实miR?296?5p与Snail1的靶向关系；db/db小鼠肾组织中Snail1 mRNA和蛋白表达显著升高（P < 0.001，P=0.005），E?cadherin mRNA和蛋白表达降低（P=0.012，P=0.020），α?SMA mRNA表达增加（P=0.042）。结论：miR?296?5p在db/db小鼠血浆外泌体中低表达，进而可能通过血浆外泌体递送，靶向上调肾小管上皮细胞Snail1，诱导肾小管上皮细胞EMT，加速DN肾间质纤维化。