肽核酸夹提高孕妇血浆胎儿父源性β珠蛋白突变基因检出率的研究

目的 探讨利用肽核酸夹提高孕妇血浆胎儿父源性β珠蛋白突变基因的检出率,为地中海贫血(地贫)无创性产前诊断提供依据.方法 选择妊娠7 ～ 20周的孕妇共38例,丈夫基因型为41-42M/N,而孕妇基因型正常或为其他β地贫基因突变.以羊水、脐带血或出生后婴儿外周血标本的检测结果作为金标准对照.用QIAamp DNA Blood Mini试剂盒提取孕妇血浆总游离DNA,再将总游离DNA经过10 g/L琼脂糖凝胶电泳后回收长度100 ～ 300 bp的DNA,然后应用回收后的DNA并加肽核酸夹进行PCR扩增,最后采用反向斑点杂交确定基因型并与金标准检测结果进行比较.同时设置扩增方法不同的A、B对照组,对照组A应用总游离DNA并加肽核酸夹,对照组B应用回收后的DNA不加肽核酸夹进行验证.结果 共对38例孕妇外周血浆DNA标本的PCR产物进行杂交检测并和金标准结果进行比较.21例金标准基因型为41-42M/N的标本中,实验组、对照组A和B分别有19、8、12例检出41-42M,敏感度分别为90.5％、38.1％和57.1％;17例金标准基因型正常(N)的标本中,实验组、对照组A和B分别有1、1、2例出现假阳性,特异度分别为94.1％、94.1％和88.2％;准确度分别为92.1％、63.2％和71.1％.进行McNemar x2检验两两比较,实验组与对照组A和B的敏感度和准确度差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 利用肽核酸夹对孕妇外周血浆中小片段游离胎儿DNA检测胎儿父源性β-珠蛋白基因突变的方法,不仅具有较高的敏感度、特异度和准确度,而且方法简便、实用.