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| LIGHT基因的克隆及其可溶性表达 | |
| 引用本文： | 吴东,沈锋,娄永华,焦炳华,吴孟超. LIGHT基因的克隆及其可溶性表达[J]. 中华微生物学和免疫学杂志, 2002, 22(5): 541-545 |
| 作者姓名： | 吴东 沈锋 娄永华 焦炳华 吴孟超 |
| 作者单位： | 1. 第二军医大学东方肝胆外科医院 2. 第二军医大学基础部分子生物学与生物化学教研室 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 (3 0 1710 5 1) |
| 摘 要： | 目的 克隆LIGHT基因 ,构建含有人LIGHT基因的表达载体 ,诱导其在大肠杆菌中可溶性表达 ,并对表达的LIGHT蛋白的生物学活性进行检测。方法 从人的外周血单个核细胞中克隆LIGHT全长cDNA及其胞外区片段 ,并将其胞外区片段亚克隆至原核表达载体pET 11a中 ,筛选阳性重组质粒pET LIGHT ,以IPTG诱导其可溶性表达 ,并以SDS PAGE和Westernblot检测进行分析。表达的蛋白初步纯化后 ,进行生物学活性分析。结果 RT PCR扩增出了LIGHT全长 72 3bp的cDNA。SDS PAGE和Westernblot分析证实重组pET LIGHT质粒可表达出相对分子质量 (Mr)为 19× 10 3的蛋白。可溶性LIGHT重组蛋白可共刺激T细胞的增殖及诱导IFN γ的产生。结论 本实验成功地将LIGHT胞外区片段在大肠杆菌中进行表达 ,表达的蛋白具有生物学功能 ,这为进一步的LIGHT基因的功能研究打下了基础 |
| 关 键 词： | 人LIGHT基因 基因克隆 基因表达 生物学 |
| 修稿时间： | 2001-10-24 |
Gene cloning, soluble expression and bioactivity analysis of LIGHT |
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| WU Dong ,SHEN Feng,LOU Yonghua,JIAO Binghua,WU Mengchao. Eastern Hepatobiliary Hospital,Second Military Medical University,Shanghai ,China. Gene cloning, soluble expression and bioactivity analysis of LIGHT[J]. Chinese Journal of Microbiology and Immunology, 2002, 22(5): 541-545 | |
| Authors: | WU Dong SHEN Feng LOU Yonghua JIAO Binghua WU Mengchao. Eastern Hepatobiliary Hospital Second Military Medical University Shanghai China |
| Affiliation: | WU Dong *,SHEN Feng,LOU Yonghua,JIAO Binghua,WU Mengchao. *Eastern Hepatobiliary Hospital,Second Military Medical University,Shanghai 200438,China |
| Abstract: | |
| Keywords: | Human LIGHT gene Gene clone Gene expression Bioactivity |
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