田蓟苷下调TLR4/Myd88/NF-κB信号通路抑制NLRP3炎症小体和炎症反应

本研究通过脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导RAW264.7细胞建立炎症反应模型,探讨田蓟苷(tilianin)对炎症反应的影响及其作用机制。通过CCK-8 (cell counting kit-8)实验检测细胞活力,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA)检测肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)和白细胞介素6(interleukin6,IL-6)含量;Griess试剂法检测一氧化氮(nitricoxide,NO)含量;2', 7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen radical, ROS)水平;Western blot检测Toll样受体4 (Toll-like receptor 4, TLR4)、髓样分化因子88 (myeloid differentiation primary response gene 88, Myd88)、核转录因子-κB p65 (nuclear factor-κB p65, NF-κB p65)、磷酸化核转录因子-κB (phospho-nuclear factor-κB, p-NF-κB)、NF-κB抑制蛋白α (inhibitor of NF-κB α, IκBα)和磷酸化NF-κB抑制蛋白α (phospho-inhibitor of NF-κB α, p-IκBα)的蛋白表达水平; qRT-PCR法和Western blot检测Nod样受体蛋白3 (Nod-like receptor protein 3,NLRP3)、IL-1β前体(pro-IL-1β)、IL-18前体(pro-IL-18)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1前体(pro-caspase-1)的mRNA和蛋白水平。免疫荧光染色检测NF-κB p65核转位;使用TLR4抑制剂resatorvid (TAK242)进一步验证田蓟苷对TLR4/Myd88/NF-κB信号通路的影响。结果显示,田蓟苷显著降低了RAW264.7细胞上清中TNF-α、IL-6和NO水平以及细胞内ROS含量。田蓟苷降低了TLR4、Myd88、p-NF-κB p65和p-IκBα蛋白表达水平,抑制了NF-κB p65的核转位,同时显著降低了NLRP3、pro-IL-1β、pro-IL-18和pro-caspase-1的蛋白表达水平以及NLRP3和pro-IL-1β的mRNA水平。上述研究结果表明,田蓟苷能明显减轻LPS诱导RAW264.7细胞产生的炎症反应,其机制可能与下调TLR4/Myd88/NF-κB信号通路从而抑制NLRP3炎症小体有关。