| 人血管生成素1和血管内皮生长因子165重组腺病毒载体构建及目的基因表达 |
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| 引用本文： | 刘铁连,谢宇锋,盛伟华,缪竞成,单云波,胡志清,井莹莹,杨吉成.人血管生成素1和血管内皮生长因子165重组腺病毒载体构建及目的基因表达[J].中国组织工程研究与临床康复,2008,12(41):8103-8106. |
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| 作者姓名： | 刘铁连 谢宇锋 盛伟华 缪竞成 单云波 胡志清 井莹莹 杨吉成 |
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| 作者单位： | 苏州大学基础医学系细胞与分子生物教研室,江苏省苏州市,215123 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划(九七三计划) |
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| 摘 要： | 目的:拟构建人血管生成素1和血管内皮生长因子165腺病毒载体,观察靶细胞转染后目的基因的表达水平。方法:通过RT-PCR方法克隆人Ang-1全长编码基因,PCR法以pcDNA3.0-VEGF165质粒为模板扩增VEGF165基因,分别将目的基因酶切连接到带有GFP标记的pTrack-CMV质粒上,构建重组质粒pTrack-CMV-Ang-1和pTrack-CMV-VEGF165,经PCR、酶切和测序鉴定后将其PmeI线性化与腺病毒质粒pAdeasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒载体pAdeasy-1-pTrack-CMV-Ang-1/VEGF165,经PacI线性化后转染QBI-293A包装细胞,收获重组腺病毒Ad-Ang-1及Ad-VEGF165。结果:PCR﹑双酶切和测序鉴定结果证实成功构建pTrack-CMV-Ang-1/VEGF165重组转移质粒,PmeI线性化后重组腺病毒载体获得成功包装。脂质体转染QBI-293A细胞后光镜下可见由腺病毒引起的细胞圆缩、聚集呈菌落状的典型细胞病理性改变;荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达,且荧光强度随培养时间延长而逐渐增强;经多轮感染、扩增后,病毒效价可达(2.0～5.0)×1010pfu/mL。转染48h后,293A细胞中的血管生成素1与血管内皮生长因子含量均明显提高(F=427.93,17.93,P<0.05)。结论:成功构建并获得了Ad-Ang-1及Ad-VEGF165重组腺病毒,血管生成素1与血管内皮生长因子165均能在靶细胞中有效表达。
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| 关 键 词： | 血管生成素1 血管内皮生长因子 腺病毒载体 构建 |
Construction and target gene expression of adenovirus vectors containing angiogenin-1/vascular endothelial growth factor 165 |
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| Liu Tie-lian,Xie Yu-feng,Sheng Wei-hua,Miao Jing-cheng,Shan Yun-bo,Hu Zhi-qing,Jing Ying-ying,Yang Ji-cheng.Construction and target gene expression of adenovirus vectors containing angiogenin-1/vascular endothelial growth factor 165[J].Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2008,12(41):8103-8106. |
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| Authors: | Liu Tie-lian Xie Yu-feng Sheng Wei-hua Miao Jing-cheng Shan Yun-bo Hu Zhi-qing Jing Ying-ying Yang Ji-cheng |
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