| 小鼠胚胎成纤维细胞饲养层制备条件的研究 |
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| 引用本文： | 王国云,李栋,张辉,白增亮. 小鼠胚胎成纤维细胞饲养层制备条件的研究[J]. 山东大学学报(医学版), 2005, 43(5): 396-400 |
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| 作者姓名： | 王国云 李栋 张辉 白增亮 |
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| 作者单位： | 山东大学生命科学学院,山东,济南,250100;山东大学生命科学学院,山东,济南,250100;山东大学生命科学学院,山东,济南,250100;山东大学生命科学学院,山东,济南,250100 |
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| 基金项目： | 山东省优秀中青年科学家科研奖励基金资助课题(02BS042) |
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| 摘 要： | 目的：建立小鼠胚胎成纤维细胞饲养层最佳分离培养及丝裂霉素C(MMC)处理的方法，用于培养胚胎干细胞。方法：取不同胎龄的胎鼠分离原代成纤维细胞，观察不同胎龄和培养、分离条件对细胞增殖的影响；观察不同浓度和不同作用时间下MMC对细胞增殖的抑制作用。用MTT法测定细胞增殖的数量。取妊娠3．5d的囊胚在经MMC处理的饲养层上培养，观察胚胎干细胞集落生成情况。结果：制备小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的最佳胎龄是12．5～14．5d：室温条件下，0．25％胰蛋白酶消化时间最好在3～5min之内：原代细胞培养2～4d后即可传代，MMC能抑制胚胎成纤维细胞的增殖，最佳的作用浓度和时间是20μg/ml，2～4h，成纤维细胞饲养层可以维持10d。囊胚在饲养层上能发育成典型的“鸟巢”状干细胞集落。结论：从12．5～14．5d胎龄小鼠胚胎分离培养的胚胎成纤维细胞质量最佳，经20μg／ml MMC处理2～4h后，可以作为饲养层用于胚胎干细胞的分离克隆。
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| 关 键 词： | 小鼠 胚胎成纤维细胞 胚胎干细胞 丝裂霉素C 饲养层 |
| 文章编号： | 1671-7554(2005)05-0396-05 |
| 修稿时间： | 2003-12-12 |
Conditions for establishing mouse embryonic fibroblast feeder layers |
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| WANG Guo-yun,LI Dong,ZHANG Hui,BAI Zeng-liang. Conditions for establishing mouse embryonic fibroblast feeder layers[J]. Journal of Shandong University:Health Sciences, 2005, 43(5): 396-400 |
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| Authors: | WANG Guo-yun LI Dong ZHANG Hui BAI Zeng-liang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Mice Embryonic fibroblasts Embryonic stem cells Mytomycin C Feeder layers |
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