雷帕霉素诱导急性T淋巴白血病细胞自噬分子机制的研究

目的：研究不同浓度雷帕霉素对急性白血病CD4+T-Jurkat细胞增殖的影响，并从自噬方面探讨其作用机制。方法：MTT法检测不同浓度雷帕霉素对细胞增殖的影响；流式细胞术检测细胞凋亡率和周期阻滞；吖啶橙染色观察自噬溶酶体的变化；转录组测序数据分析自噬相关基因的差异表达；RT-qPCR和Western Blot实验检测自噬相关基因的转录和蛋白质表达水平；FAIRE-qPCR分析自噬基因启动子区的染色质可及性状态。结果：与对照组相比，雷帕霉素呈浓度和时间依赖性方式抑制Jurkat细胞的增殖；并将细胞周期阻滞在G0/G1期，但不能有效诱导细胞凋亡。通过吖啶橙染色观察，给药后可见自噬溶酶体的数量增加。RNA-seq数据显示，雷帕霉素可以显著影响自噬相关基因的转录水平。不同浓度雷帕霉素作用于Jurkat细胞48 h后，10 nmol/L和20 nmol/L浓度的雷帕霉素可上调ULK1、ATG13、ATG16L2、PI3K3R1、Raptor基因的表达，下调MAPK1基因的表达；50 nmol/L时，下调各基因的表达水平。自噬基因启动子区域染色质可及性也随之发生改变，与基因表达变化趋势基本一致。结论...