| 人MDC1基因shRNA反转录病毒载体的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 袁成福,黄秀凝,程莉,卜友泉,刘涛,刘革力,易发平,宋方洲. 人MDC1基因shRNA反转录病毒载体的构建及鉴定[J]. 解放军医学杂志, 2009, 34(4): 441-444 |
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| 作者姓名： | 袁成福 黄秀凝 程莉 卜友泉 刘涛 刘革力 易发平 宋方洲 |
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| 作者单位： | 400016,重庆,重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心;湖北民族学院医学院生物化学教研室;重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心,重庆,400016 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金,教育部高等学校博士学科点专项科研基金,重庆市科委自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的 建立反转录病毒介导的MDC1基因RNA干扰表达体系并观察其在官颈癌细胞(HeLa)中对MDC1表达的影响.方法 将人MDC1基因的RNA干扰双链DNA片段重组到反转录病毒质粒pSilencer5.1-H1 Retro中,构建携带人MDC1基因的RNA干扰反转录病毒载体psiRNA-MDC1.经PT67细胞包装后,产生的莺组反转录病毒感染宫颈癌细胞株HeLa细胞,并用嘌呤霉素筛选稳定的细胞克隆.采用RT-PCR和Western blotting检测细胞中MDC1 mRNA和蛋白表达的变化.结果 重组psiRNA-MDC1质粒经测序鉴定正确;重组反转录病毒感染HeLa细胞后用嘌呤霉素筛选出稳定的细胞克隆;RT-PCR和Western blotting检测人MDC1 mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未十扰组.结论 携带人MDC1基因RNA干扰双链DNA片段的反转录病毒感染HeLa细胞后能明显抑制MDC1 mRNA和蛋白表达,为进一步研究MDC1在宫颈癌中的作用奠定了基础.
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| 关 键 词： | psiRNA-MDC1反转录病毒载体 MDC1基因 宫颈癌 |
Construction and identification of recombinant retroviral vector expressing shRNA targeting human MDC1 |
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