| 增殖细胞核抗原突变体的稳定高表达对HeLa细胞顺铂敏感性的影响 |
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| 引用本文： | 位全芳,曾益军,杨劲,周虎传,刘洋,徐志刚,袁方,赵友光. 增殖细胞核抗原突变体的稳定高表达对HeLa细胞顺铂敏感性的影响[J]. 医学分子生物学杂志, 2008, 5(6). DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2008.06.007 |
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| 作者姓名： | 位全芳 曾益军 杨劲 周虎传 刘洋 徐志刚 袁方 赵友光 |
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| 作者单位： | 第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,重庆市,400038;第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所,重庆市,400038 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，全军医学科研"十一五"计划国际合作项目 |
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| 摘 要： | ![]()
目的 建立稳定高表达增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)或突变体PC-NA(mutant PCNA,mPCNA)目的蛋白的宫颈癌细胞系HeLa细胞,观察PCNA在顺铂诱导的DNA损伤修复中的作用.方法 采用显性负突变策略,通过构建重组人PCNA或mPCNA的真核表达质粒pCDNA3.1/V5-His A-PCNA(His-PCNA)和pCDNA31/V5-His A-mPCNA(His-mPCNA),稳定转染到HeLa细胞中,G418筛选建立稳定高表达目的蛋白的HeLa细胞系;Western印迹法检测蛋白的表达情况;MTT法测定顺铂损伤后不同细胞系的细胞存活率.结果 真核表达质粒经酶切、测序分析与实验设计完全一致;稳定建系后,Western印迹结果显示在相应位置可见清楚的目的条带;MTT结果显示稳定高表达突变体PCNA的细胞系与对照组相比,其细胞存活率呈明显下降趋势.结论 成功构建了真核表达质粒His-PCNA和His-mPC-NA;建立了稳定高表达该质粒的HeLa细胞系;稳定高表达突变体PCNA的细胞系对顺铂损伤更敏感.
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| 关 键 词： | 增殖细胞核抗原 稳定转染 HeLa细胞 顺铂 |
Effects of Overexpression of Mutant PCNA on Cisplatin-Induced Cytotoxicity in HeLa Cells |
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| WEI Quanfang,ZENG Yijun,YANG Jin,ZHOU Huchuan,LIU Yang,XU Zhigang,YUAN Fang,ZHAO Youguang. Effects of Overexpression of Mutant PCNA on Cisplatin-Induced Cytotoxicity in HeLa Cells[J]. Journal of Medical Molecular Biology, 2008, 5(6). DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2008.06.007 |
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| Authors: | WEI Quanfang ZENG Yijun YANG Jin ZHOU Huchuan LIU Yang XU Zhigang YUAN Fang ZHAO Youguang |
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| Abstract: | ![]()
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