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新基因HA117最佳siRNA的筛选及重组腺病毒构建
作者姓名:郑改焕  金先庆  罗庆  郭玉霞  宿玉玺  徐酉华
作者单位:重庆医科大学附属儿童医院血液科,重庆,400014;重庆医科大学附属儿童医院血液科,重庆,400014;重庆医科大学附属儿童医院血液科,重庆,400014;重庆医科大学附属儿童医院血液科,重庆,400014;重庆医科大学附属儿童医院血液科,重庆,400014;重庆医科大学附属儿童医院血液科,重庆,400014
基金项目:国家自然科学基金面上项目 
摘    要:
目的 验证pSOS-HUS筛选目的 基因最佳siRNA的效果,应用pSOS-HUS筛选新基因HA117最佳siRNA,构建携带HA117基因最佳siRNA转录模板DNA的重组腺病毒.方法 构建携带HA117基因及其siRNA模板DNA链的双克隆质粒.把双克隆质粒分别转染293细胞,通过镜下观察、流式细胞仪检测比较绿色荧光表达强度,RT-PCR检测HA117基因mRNA表达,筛选鉴定基因HA117最佳siRNA.构建HA117基因RNA干扰重组腺病毒.结果 从5对模板DNA链中筛选出最有效片段HAi5,构建携带HAi5的重组腺病毒.结论 载体pSOS-HUS可快捷有效地筛选目的 基因的最佳siRNA;在5对模板DNA中,HAi5转录的siRNA对新基因HA117干扰效果最强;成功构建携带HAi5的重组腺病毒.

关 键 词:HA117基因  pSOS-HUS  RNA干扰  多药耐药
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