| 耐草甘膦基因G6原核表达蛋白条件的优化及其免疫反应性分析 |
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| 引用本文： | 吕莉琨,苏旭,王静,李力,杨东靖,刘洪亮. 耐草甘膦基因G6原核表达蛋白条件的优化及其免疫反应性分析[J]. 环境与健康杂志, 2012, 29(8): 678-681 |
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| 作者姓名： | 吕莉琨 苏旭 王静 李力 杨东靖 刘洪亮 |
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| 作者单位： | 天津市疾病预防控制中心病原生物检测所,天津,300011 |
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| 基金项目： | 国家“十一五”转基因重大专项 |
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| 摘 要： | 目的在大肠杆菌中表达耐草甘膦基因G6,并对其进行免疫反应性分析。方法将已构建好的携带G6基因的重组质粒pET28a-G6转化到大肠杆菌BL21中诱导表达,分别从诱导温度、异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度及诱导时间进行了表达条件的探索。获得的重组蛋白在非变性条件下镍亲和层析纯化后,经质谱鉴定,对其免疫反应活性进行测定,分析该原核表达蛋白与转G6基因水稻中蛋白的等同性。结果利用原核表达系统成功实现了G6重组蛋白的高效表达,其最适条件为:0.5 mmol/L IPTG、30℃和160 r/min摇床转速诱导7 h。质谱鉴定为5-烯醇式丙酮酸-莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)。Western blot鉴定后,表达的重组蛋白与转G6基因水稻中的G6蛋白有相同的免疫反应性。结论利用原核表达系统表达的G6重组蛋白可以替代植物外源蛋白进行转G6基因产品的食用安全性评价,也可用于转G6基因产品ELISA检测的抗体制备。
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| 关 键 词： | G6重组蛋白 原核表达 5-烯醇式丙酮酸-莽草酸-3-磷酸合成酶 等同性 |
Optimization on prokaryotic expression conditions of glyphosate: resistant G6 gene and its immunoreactivity |
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| L Li-kun , SU Xu , WANG Jing , LI Li , YANG Dong-jing , LIU Hong-liang. Optimization on prokaryotic expression conditions of glyphosate: resistant G6 gene and its immunoreactivity[J]. Journal of Environment and Health, 2012, 29(8): 678-681 |
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| Authors: | L Li-kun SU Xu WANG Jing LI Li YANG Dong-jing LIU Hong-liang |
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| Affiliation: | L(U) Li-kun , SU Xu , WANG Jing , LI Li , YANG Dong-jing , LIU Hong-liang |
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