人食管癌细胞cDNA表达文库的构建和鉴定

目的 构建人食管癌细胞cDNA噬菌体表达文库。方法 从食管癌细胞中提取总RNA，利用磁珠吸附法分离其中的mRNA，逆转录合成cDNA第一链，再通过碱基互补配对原则合成第二链，对双链cDNA进行末端修饰，连接EcoRⅠ适配子，磷酸化EcoRⅠ适配子5′端，除去不合要求的cDNA片段，将符合要求的与载体（噬菌体T7 Select10-3b）连接，然后进行体外包装建成初步的cDNA文库，并对文库进行鉴定。结果 食管癌细胞cDNA原始表达文库的滴度为2.01×106 pfu/mL，重组率高达100%，插入片段的大小范围在300～1 500 bp之间。结论 本实验成功构建了人食管癌T7噬菌体展示cDNA表达文库，并经过了初步鉴定，为下一步利用重组表达cDNA克隆的血清学分析技术（SEREX技术）鉴定食管癌相关抗原奠定基础。

Construction and Identification of the cDNA Expression Library for Human Esophageal Cancer Cells