铜绿假单孢菌聚合酶链反应微孔膜杂交基因诊断在检测临床标本中的应用

[目的]研究痰液标本的铜绿假单孢菌(P．A)DNA提取，聚合酶链反应微孔膜杂交基因诊断方法，并与目前培养、氧化酶方法比较。[方法]使用4％NaOH液化，生理盐水稀释痰液，以及在痰液加tritoa-x100等核酸捏取方法作对比，获得最佳标本处理方法，再以此方法处理痰液及棉拭子标本，进行基因诊断方法与培养、氧化酶检验方法阳性检出率的对比。[结果]在检测的120例临床标本中，采用培养法检出阳性7例，阳性率6％；用PCR及PCR微孔膜杂交检测全部阳性。在检测敏感度上，培养法可检出150个细菌／ml，而PCR微孔膜杂交可检出3个细菌／ml。[结论]4％NaOH液化与生理盐水稀释，离心的标本核酸提取方法，不适应于P．A DNA聚合酶链反应微孔膜杂交，添加tritoa-x100处理标本可提高标本的阳性检出率，其阳性检出率明显高于目前培养和氧化酶方法，方法简便准确可靠，适用于临床。