| 表达HIF1α与EGFP融合蛋白的重组逆转录病毒载体构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 段小军,周跃,杨柳,董世武,唐康来.表达HIF1α与EGFP融合蛋白的重组逆转录病毒载体构建及鉴定[J].重庆医学,2005,34(3):373-375. |
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| 作者姓名： | 段小军 周跃 杨柳 董世武 唐康来 |
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| 作者单位： | 第三军医大学西南医院关节外科,重庆,400038;第三军医大学新桥医院骨科,重庆,400037;第三军医大学基础部解剖学教研室,重庆,400038 |
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| 摘 要： | 目的构建表达人缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与EGFP融合蛋白的重组逆转录病毒载体,并观察其对NIH3T3细胞感染效率.方法采用基因工程技术,将HIF-1α基因片段克隆至逆转录病毒载体pLEGFP-N1上,鉴定后用脂质体法转染PT67细胞包装、扩增,最后用重组逆转录病毒感染NIH3T3细胞.其中采用PCR方法对重组病毒进行鉴定,利用绿色荧光蛋白作为报告基因,对病毒滴度和感染效率进行监测.结果酶切、测序及PCR结果与HIF-1α基因重组逆转录病毒载体的预期结果一致,病毒滴度达1.2×106 pfu/ml,并对NIH3T3细胞有强感染能力.结论应用基因工程技术,成功构建了表达HIF-1α与EGFP融合蛋白的重组逆转录病毒载体,为应用于治疗性血管生成创造了条件.
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| 关 键 词： | 逆转录病毒 缺氧诱导因子-1 基因克隆 |
| 文章编号： | 1671-8348(2005)03-0373-03 |
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