新生小鼠耳蜗血管纹边缘细胞的原代培养及鉴定

目的 建立稳定的新生小鼠耳蜗血管纹边缘细胞的体外培养体系,为研究边缘细胞的形态和功能提供良好的条件和模型.方法 用机械分离和化学消化结合的方法制成细胞悬液,将其接种于3.5 cm培养皿中贴壁生长,加入含有10%胎牛血清、氢化可的松、表皮生长因子、三碘甲状腺原氨酸、胰岛素、转铁蛋白等促进生长成分的完全培养液,于37℃、5% CO2/95%空气的恒温培养箱内培养,每日观察细胞生长状况,每周换液2次.使用细胞角蛋白18通过免疫细胞化学技术鉴定细胞的中间丝类型.制作透射电镜标本观察细胞的超微结构.结果 光镜下,培养24 h至第4天可见培养皿内细胞贴壁,未见明显增长.第5天,多角形细胞开始增多.第7天,在成片的梭形细胞区域内,多角形细胞呈单层极性排列,形成细胞岛,呈典型的铺路石样外观.第10天,可见dome形成.第14天后,两种细胞混杂生长,部分多角形细胞胞体增大,胞质内空泡增多,呈泡沫样外观.细胞最长生长21 d.免疫细胞化学染色显示多角形细胞表达细胞角蛋白18.透射电镜下见多角形细胞为1个或2个卵圆形核,有丰富的细胞器并有分泌小泡,可见微绒毛等上皮细胞特征.结论 采用机械分离和化学消化结合的边缘细胞培养方法,成功建立了小鼠血管纹边缘细胞的体外培养模型,经过免疫细胞化学鉴定证实,这一培养体系是稳定、可靠的.

Primary Culture and Identification of Marginal Cells of Stria Vascularis of Neonatal Mice