| 显性负突变存活素质粒的构建 |
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| 引用本文： | 蔡文杰,王铭洁,张宇玲,琚立华,朱依纯.显性负突变存活素质粒的构建[J].基础医学与临床,2009,29(2):188-192. |
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| 作者姓名： | 蔡文杰 王铭洁 张宇玲 琚立华 朱依纯 |
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| 作者单位： | 1. 上海理工大学医疗器械与食品学院基础医学教研室,上海,200093
2. 复旦大学上海医学院生理与病理生理学系,上海,200032 |
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| 基金项目： | 上海高校选拔培养优秀青年教师科研专项基金 |
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| 摘 要： | 目的 构建显性负突变存活素质粒。方法 从大鼠心脏微血管内皮细胞中提取总RNA，反转录成cDNA后，利用巢式PCR扩增存活素基因全序列，并引入酶切位点，利用重叠PCR对存活素基因进行定点突变，然后与带绿色荧光的真核表达载体pEGFP-N3进行重组，经测序鉴定后转染细胞，观察对细胞凋亡的影响。结果 用巢式PCR扩增出含存活素基因的496 bp产物，和引入酶切位点后的452 bp产物。通过重叠PCR 3次PCR反应，得到452 bp大小的定点突变产物。重组载体经测序鉴定表明插入片段无误，转染细胞后能发出明亮的绿色荧光， Hochest染色显示细胞凋亡比空质粒对照组显著。结论 成功构建了显性负突变存活素质粒。
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| 关 键 词： | 显性负突变 存活素 重叠PCR |
| 收稿时间： | 2008-6-11 |
| 修稿时间： | 2008-7-3 |
Plasmid construction of a dominant negative survivin mutant |
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| CAI Wen-jie,WANG Ming-jie,ZHANG Yu-ling,JU Li-hua,ZHU Yi-chun.Plasmid construction of a dominant negative survivin mutant[J].Basic Medical Sciences and Clinics,2009,29(2):188-192. |
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| Authors: | CAI Wen-jie WANG Ming-jie ZHANG Yu-ling JU Li-hua ZHU Yi-chun |
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