| 荧光定量PCR法在重组逆转录病毒pLXSN-BDNF滴度测定中的应用 |
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| 引用本文： | 周欣荣,原慧萍,李鸿翼,邵正波,王雅.荧光定量PCR法在重组逆转录病毒pLXSN-BDNF滴度测定中的应用[J].中华微生物学和免疫学杂志,2007,27(8):766-770. |
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| 作者姓名： | 周欣荣 原慧萍 李鸿翼 邵正波 王雅 |
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| 作者单位： | 150086,哈尔滨医科大学附属第二医院眼科 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（30471844）;黑龙江省教育厅资助项目（10551187） |
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| 摘 要： | 目的制备含大鼠脑源性神经营养因子（BDNF）基因的逆转录病毒，建立荧光定量PCR测定滴度的方法。方法扩增BDNF基因，构建重组质粒pLXSN-BDNF，将其转染包装细胞，经G418筛选、病毒浓缩后用荧光定量PCR法和克隆形成法测定滴度。结果经PCR、酶切和测序鉴定，BDNF基因成功插入逆转录病毒载体中，筛选得到稳定的分泌重组病毒细胞系。重组病毒100倍浓缩后经荧光定量PCR法和克隆形成法测定的滴度分别为6．92×10^6拷贝/ml和3．2×10^5CFU/ml，两种方法测得的结果差异有统计学意义（P〈0．05）。结论成功扩增BDNF基因，制备了重组病毒pLX—SN-BDNF，建立了荧光定量PCR检测滴度的方法，为基因治疗青光眼性视神经损伤的实验研究提供重要参考指标。
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| 关 键 词： | 脑源性神经营养因子 逆转录病毒 荧光定量PCR |
| 修稿时间： | 2007-02-05 |
Determination of recombinant retrovirus pLXSN-BDNF titer with fluorescent quantitative PCR |
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| ZHOU Xin-rong,YUAN Hui-ping,LI Hong-yi,SHAO Zheng-bo,WANG Ya.Determination of recombinant retrovirus pLXSN-BDNF titer with fluorescent quantitative PCR[J].Chinese Journal of Microbiology and Immunology,2007,27(8):766-770. |
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| Authors: | ZHOU Xin-rong YUAN Hui-ping LI Hong-yi SHAO Zheng-bo WANG Ya |
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| Institution: | Department of Ophthalmology, the Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University, Harbin 150086, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Brain-derived neurotrophic factor Retrovirus Fluorescent quantitative PCR |
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