| 携带反义MDR1基因的逆转录病毒载体的构建和表达 |
| |
| 引用本文： | 王玮,傅建新,陈子兴,岑建农,李建勇,薛永权. 携带反义MDR1基因的逆转录病毒载体的构建和表达[J]. 江苏医药, 2002, 28(10): 732-734,T001 |
| |
| 作者姓名： | 王玮 傅建新 陈子兴 岑建农 李建勇 薛永权 |
| |
| 作者单位： | 215006,苏州大学附属第一医院、江苏省血液研究所;南京医科大学第一附属医院 |
| |
| 基金项目： | 江苏省自然科学基金 (BK97165 ),江苏省卫生厅科研基金 (H95 49),江苏省卫生厅青年科研基金(Q970 5 ) |
| |
| 摘 要： | 目的 建立逆转录病毒介导的反义多药耐药MDR1基因转移体系 ,探讨反义RNA封闭白血病耐药细胞中MDR1基因表达的能力。方法 逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法从白血病耐药细胞株HL 6 0 /VCRmRNA中扩增出含有启始密码子ATG的 5 2 4bp的MDR1基因cDNA片段 ,反向插入逆转录病毒载体 pLXSN ,通过脂质体转和乒乓感染单、双噬型包装细胞GP +E86和GP +envAM 12 ,以双嗜型病毒上清感染白血病耐药细胞K5 6 2 /MDR ,半定量RT PCR和流式细胞术(FCM)分析MDR1基因转录和P 糖蛋白 (P gp)的表达。 结果 酶切、PCR和DNA测序证实反义MDR1基因重组逆转录病毒载体 pLASSN构建正确 ;双嗜型病毒生产细胞的滴度为 1 3× 10 5CFU/ml,巢式PCR和补救分析均未检测到辅助病毒存在 ;PCR和RT PCR分析证实病毒生产细胞和反义修饰的耐药细胞K5 6 2MDR/LASSN中均有反义MDR1基因整合和MDR1基因反义RNA的转录 ;FCM分析K5 6 2MDR/LASSN细胞中P gp表达强度和表达率比对照细胞均有明显下降。 结论 逆转录病毒介导的反义基因转移系统安全有效 ,可用于肿瘤耐药逆转的研究
|
| 关 键 词： | MDR1基因 反义RNA 逆转录病毒 基因转移 基因表达 |
Construction and expression of retroviral vector carrying antisense MDR1 |
| |
| WANG Wei,FU Jianxin,CHEN Zixing,et al.. Construction and expression of retroviral vector carrying antisense MDR1[J]. Jiangsu Medical Journal, 2002, 28(10): 732-734,T001 |
| |
| Authors: | WANG Wei FU Jianxin CHEN Zixing et al. |
| |
| Affiliation: | WANG Wei,FU Jianxin,CHEN Zixing,et al. The First Affiliated Hospital of Soozhou University,Jiangsu Institute of Hematology,Suzhou 215006 |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Antisense RNA MDR1 gene Retrovirus Gene transfer Gene expression |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
