MiR-199a 修饰的间充质干细胞来源外泌体通过 Akt/HIF-1α/DRP1 轴促进缺糖缺氧/复糖复氧模型心肌细胞H9c2线粒体修复

目的 探讨miR-199a修饰的间充质干细胞（MSCs）来源的外泌体修复缺糖缺氧/复糖复氧模型心肌细胞H9c2线粒体的作用机制。方法 体外培养 MSCs,转染 miR-199a mimics 或 miR-NC,48～72 h 后收集外泌体,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测外泌体的 miR-199a水平。将 H9c2细胞分为对照组、模型组、miR-199a修饰外泌体（Exos^mimic,终质量浓度 50 μg·mL^-1）组、miRNA 阴性对照修饰外泌体（Exos^NC,终质量浓度 50 μg·mL^-1）组和 miR-199a修饰外泌体＋蛋白激酶 B（Akt）抑制剂（Exos^mimic＋MK2206 10 μg·mL^-1）组,除对照组外,制备缺糖缺氧/复糖复氧模型。应用 CCK-8 法检测各组细胞存活率,酶标仪检测各组细胞三磷酸腺苷（ATP）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平以及上清液8-羟基脱氧尿苷（8-OHdG）、乳酸脱氢酶（LDH）水平;共聚焦显微镜检测各组线粒体膜电位（ΔΨm）和线粒体动力学变化;Western blotting法检测各组缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和线粒体动力相关蛋白1（DRP1）蛋白表达变化。结果 与对照组比较,Exos^mimic中 miR-199a 表达水平明显升高（P＜0.05）,提取的外泌体直径平均为 109.3 nm,浓度为 1×10⁶颗粒·mL^-1。与对照组比较,模型组细胞存活率和ATP、SOD、ΔΨm水平显著下降,LDH、MDA、8-OHdG水平和HIF-1α和DRP1蛋白表达水平显著升高（P＜0.01、0.001）,线粒体分裂水平增加;与模型组比较,Exos^mimic组细胞存活率和ATP、SOD和ΔΨm水平显著升高,LDH、MDA、8-OHdG水平和HIF-1α及DRP1蛋白表达水平显著下降（P＜0.01、0.001）,线粒体分裂水平减少;MK2206能明显逆转Exos^mimic效果（P＜0.05、0.01）。结论 miR-199a修饰的MSCs外泌体通过Akt/HIF-1α/DRP1轴促进缺糖缺氧/复糖复氧心肌细胞线粒体修复。