黄连温胆汤对IGT大鼠骨骼肌细胞焦亡经典通路的影响

目的 基于NOD样受体蛋白3（NLRP3）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）/消皮素D（GSDMD）/白细胞介素-1β（IL-1β）/白细胞介素-18（IL-18）经典通路，探讨黄连温胆汤对糖耐量低减（IGT）大鼠骨骼肌细胞焦亡的影响，并阐释其可能作用机制。方法 健康雄性SD大鼠予45%脂肪热能的高脂饲料长期喂养20周诱导IGT大鼠模型。造模成功后将实验分为4组，分别为正常组、模型组、阳性药组（盐酸二甲双胍，0.05 g·kg^-1·d^-1）和黄连温胆汤组（7.8 g·kg^-1d^-1），正常组和模型组则给予相应体积蒸馏水，各组给药体积均为10 mL·kg^-1d^-1，连续灌胃给药4周。实验结束后取血分离血清并取大鼠骨骼肌进行液氮保存。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清IL-1β和IL-18含量；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测骨骼肌组织NLRP3，Caspase-1，GSDMD mRNA及蛋白表达水平；免疫荧光法观测骨骼肌组织GSDMD，IL-1β和IL-18蛋白表达；苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠骨骼肌组织病理学变化。结果 与正常组比较，模型组大鼠血清中IL-1β，IL-18含量和骨骼肌组织中NLRP3，Caspase-1，GSDMD mRNA及蛋白表达水平均显著升高（P<0.01）；免疫荧光检测显示IGT大鼠骨骼肌组织GSDMD，IL-18和IL-1β蛋白含量显著上升（P<0.01）；HE染色可见骨骼肌组织具有明显病理形态变化。与模型组比较，黄连温胆汤和盐酸二甲双胍组均可有效降低IGT大鼠血清IL-18和IL-1β含量和骨骼肌组织NLRP3，Caspase-1，GSDMD mRNA和蛋白表达（P<0.01）；免疫荧光技术结果表明黄连温胆汤能有效降低IGT大鼠骨骼肌组织GSDMD，IL-1β和IL-18蛋白含量（P<0.01）；HE染色结果表明黄连温胆汤能改善大鼠骨骼肌组织形态变化。结论 黄连温胆汤对IGT大鼠骨骼肌细胞焦亡具有抑制作用，其作用机制与调节细胞焦亡经典途径中NLRP3/Caspase-1/GSDMD/IL-1β/IL-18通路具有重要关系。

Effect of Huanglian Wendantang on Classical Pathway of Skeletal Muscle Pyroptosis in IGT Rats