黄芪-白花蛇舌草抑制肺癌A549细胞增殖机制

目的 从细胞水平观察黄芪-白花蛇舌草对人肺腺癌A549细胞增殖及白细胞介素-6（IL-6），磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K），蛋白激酶B（Akt），磷酸化蛋白激酶B（p-Akt），雷帕霉素靶蛋白（mTOR），缺氧诱导因子-1α（HIF-1α），细胞周期蛋白D₁（Cyclin D₁）表达量的影响，并探讨其作用的分子机制。方法 设立空白组（完全培养基），黄芪-白花蛇舌草低、中、高质量浓度组（20，40，60 mg·L^-1），顺铂低、中、高质量浓度组（5，10，20 mg·L^-1），采用噻唑蓝（MTT）比色法检测黄芪-白花蛇舌草（0，20，40，60 mg·L^-1）和顺铂（0，5，10，20 mg·L^-1）干预A549细胞24，48，72 h后的细胞活性，计算各组细胞增殖能力，筛选出各药物组最佳浓度；分别用完全培养基，黄芪-白花蛇舌草（40 mg·L^-1），顺铂（10 mg·L^-1），联合药物（40 mg·L^-1+10 mg·L^-1）干预肺腺癌A549细胞，设置为空白组、黄芪-白花蛇舌草组、顺铂组、联合组，计算各组在24，48，72 h后对A549细胞增殖抑制影响；采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测各组72 h后细胞培养上清中IL-6的水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测HIF-1α，Cyclin D₁ mRNA水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组蛋白PI3K，Akt，p-Akt，mTOR，HIF-1α，Cyclin D₁表达的变化情况。结果 在作用细胞24 h后，各黄芪-白花蛇舌草组对细胞增殖未表现出明显抑制，作用48 h，与空白组比较，黄芪-白花蛇舌草组对肿瘤细胞有明显增殖抑制作用（P<0.05），表现出时间依赖性，在作用细胞72 h，黄芪-白花蛇舌草各浓度组未表现出明显差异，故选用40 mg·L^-1为中药最佳浓度组，用于后续实验。与空白组比较，经过不同浓度顺铂干预后，细胞增殖均受到不同程度抑制（P<0.05），表现出明显的时间依赖性，基于细胞存活率考虑，选用顺铂10 mg·L^-1为最佳浓度。与空白组比较，黄芪-白花蛇舌草与顺铂联合应用明显抑制肺腺癌A549细胞增殖，增殖抑制率表现出明显的时间依赖性（P<0.05），且药物作用72 h，联合组与其他两组比较差异更加显著（P<0.01）；与空白组比较，各用药组细胞培养液IL-6分泌显著降低（P<0.01），以联合组下降更加突出。与空白组比较，黄芪-白花蛇舌草、顺铂均能降低HIF-1α，Cyclin D₁ mRNA水平（P<0.05，P<0.01），且联合用药降低幅度更加明显；各用药组PI3K，p-Akt，mTOR，HIF-1α，Cyclin D₁蛋白均明显降低（P<0.05，P<0.01），且联合组各蛋白表达量明显低于顺铂组（P<0.01）。结论 黄芪-白花蛇舌草对肺癌A549细胞增殖具有抑制作用，潜在机制可能与其抑制IL-6/PI3K/Akt/mTOR-HIF-1α轴的表达与分泌有关。

Mechanism of Scutellariae Radix-Hedyotidis Herba Against Proliferation of Lung Adenocarcinoma A549 Cells