栀子苷对大鼠肝损伤及血清、肝脏、粪便中胆汁酸的影响

目的 探讨不同剂量栀子苷对大鼠肝脏的毒性，以及对其血清、肝组织及粪便中胆汁酸的影响。方法 60只SD大鼠，雌雄各半，按体质量随机分成空白组及栀子苷（50，100，200，400 mg·kg^-1）组，共5组，每组12只，每天灌胃给药1次，连续7 d，于第8天收集大鼠血清、肝组织和盲肠内容物。检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT），门冬氨酸氨基转移酶（AST），碱性磷酸酶（ALP）活性，白蛋白（ALB），总胆红素（TBIL），总胆汁酸（TBA），肌酐（Crea），尿素（Urea）含量，肝脏组织切片分别作苏木素-伊红（HE）染色，免疫组化检测细胞角蛋白7（CK7），细胞角蛋白19（CK19）蛋白表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）测定肝组织CK7，CK19蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测胆固醇7α-羟化酶（CYP7A1），胆固醇27α-羟化酶（CYP27A1），胆固醇12α-羟化酶（CYP8B1） mRNA表达情况，采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS）测定血清、肝脏及盲肠内容物中18种胆汁酸含量。结果 与空白组比较，各剂量栀子苷组TBIL水平显著升高（P<0.01）；400 mg·kg^-1栀子苷组ALT，AST活性和TBA含量明显升高（P<0.05，P<0.01）；HE染色表明，与空白组比较，栀子苷200，400 mg·kg^-1组肝组织的汇管区有胆管反应，胆管周围有炎症细胞的浸润，尤以栀子苷400 mg·kg^-1毒性明显。栀子苷400 mg·kg^-1栀子苷组肝组织中CK7，CK19表达较空白组明显增加（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，400 mg·kg^-1栀子苷组肝组织中甘氨熊脱氧胆酸（GUDCA），甘氨猪去氧胆酸（GHDCA）含量明显下降（P<0.05，P<0.01），牛磺鹅去氧胆酸（TCDCA），猪去氧胆酸（HDCA），胆酸（CA），鹅去氧胆酸（CDCA）含量显著升高（P<0.01），甘氨胆酸（GCA），甘氨鹅去氧胆酸（GCDCA），甘氨脱氧胆酸（GDCA），甘氨石胆酸（GLCA），牛磺熊去氧胆酸（TUDCA），GUDCA，GHDCA，熊去氧胆酸（UDCA），牛磺石胆酸（TLCA）的含量占比降低，TCDCA，HDCA，CA，CDCA，脱氧胆酸（DCA）的占比增加；血清中GHDCA，石胆酸（LCA）含量显著下降（P<0.01），牛磺猪去氧胆酸（THDCA），牛磺胆酸（TCA），GCA，TCDCA，UDCA，CA，CDCA，DCA含量明显增加（P<0.05，P<0.01），CA/DCA显著升高（P<0.01），且CA与CDCA含量占比分别上升19.60%和4.63%；与空白组比较，400 mg·kg^-1栀子苷组盲肠内容物中所有的胆汁酸含量均下降，其中GCA，UDCA，HDCA，GCDCA，GDCA，TLCA，GLCA，CDCA，DCA，LCA含量明显下降（P<0.05，P<0.01）。Real-time PCR结果显示，与空白组比较，400 mg·kg^-1栀子苷组肝组织中CYP7A1，CYP27A1 mRNA表达明显增加（P<0.05，P<0.01）。结论 400 mg·kg^-1栀子苷灌胃，可导致大鼠明显的肝损伤，其肝脏、血清与粪便中胆汁酸发生显著改变，且同一种胆汁酸在肝脏、血清与粪便中的变化不尽相同。然而，由栀子苷所导致的肝损伤与体内胆汁酸变化间的因果关系尚不清楚，仍有待后续进一步研究给予阐明。

Effect of Geniposide on Liver Injury and Bile Acid Profile in Serum, Liver and Excrement of Rats