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| 小鼠Aire逆转录病毒表达载体的构建及表达 | |
| 引用本文： | 李娟,张君,张毓. 小鼠Aire逆转录病毒表达载体的构建及表达[J]. 天津医科大学学报, 2011, 17(4): 443-446,463 |
| 作者姓名： | 李娟 张君 张毓 |
| 作者单位： | 1. 天津医科大学免疫学教研室,天津,300070 2. 北京大学医学部免疫学系,北京,100191 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金青年基金资助项目，天津医科大学科学基金 |
| 摘 要： | 目的：将小鼠Aire基因定向连入MigR1-GFP质粒，得到长期稳定的Aire逆转录病毒表达载体，收集逆转录病毒上清感染胸腺基质细胞，为研究Aire在胸腺细胞终末分化中的作用奠定基础。方法：以小鼠胸腺基质细胞的cDNA为模板扩增得到Aire的ORF片段；将该片段连接入MigR1-GFP质粒；将构建成功的Aire—MigR1-GFP质粒转染293T细胞，收集逆转录病毒上清；使用逆转录病毒上清感染胸腺基质细胞系MTEC9，流式细胞仪检测感染效率，Western blot确定Aire蛋白的表达。结果：（1）成功得到Aire的ORF片段。（2）构建的Aire逆转录病毒表达质粒能够成功表达Aire蛋白。（3）逆转录病毒上清成功感染胸腺基质细胞系MTEC9。结论：成功构建了小鼠Aire逆转录病毒表达载体，并实现了Aire蛋白在胸腺基质细胞系中的强制性表达。 |
| 关 键 词： | 小鼠 Aire MigR1 胸腺基质细胞 |
Construction and expression of recombinant retroviral vector bearing murine Aire gene |
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| LI Juan,ZHANG Jun,ZHANG Yu. Construction and expression of recombinant retroviral vector bearing murine Aire gene[J]. Journal of Tianjin Medical University, 2011, 17(4): 443-446,463 | |
| Authors: | LI Juan ZHANG Jun ZHANG Yu |
| Affiliation: | LI Juan 1,ZHANG Jun 2,ZHANG Yu 2(1.Department of Immunology,Tianjin Medical University,Tianjin 300070,China,2.Department of Immunology,Peking University Health Science Center,Beijing 100191,China) |
| Abstract: | Objective: To construct a recombinant retroviral vector bearing murine Aire gene and establish a thymic epithelial cell line for stable expression of Aire.Methods: Aire ORF was amplified by PCR using the cDNA of mouse thymic stromal cells freshly isolated as template,and subcloned into MigR1-GFP vector to obtail MigR1-Aire-GFP vector.After introducing the MigR1-Aire-GFP into 293T package cells,the cell culture supernatant was used to infect MTEC9.The efficiency of infection was determined by FACS.Western bl... |
| Keywords: | Mouse Aire MigR1 Thymic stromal cell |
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